背景及目的多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是人类浆细胞病中最常见的一种类型,约占所有血液系统肿瘤的10%,好发于中老年人,但病因尚不清楚。其是由于恶性浆细胞在骨髓内增殖、浸润并导致大量单克隆免疫球蛋白在体内不同部位分泌与沉积,从而引起了肾功能不全、高黏滞综合征、骨质破坏、贫血、高钙血症、淀粉样变性等一系列临床表现。虽然近10年来,随着新药的不断研发与干细胞移植术的开展,MM患者的总体生存时间和生活质量都得到了极大的提高,但MM至今仍然是一种难以治愈的疾病。MM是一种高度异质性疾病,患者的首发症状、临床表现及生存时间等都具有明显的差异性,因此个体化治疗方式的选择及对其进行分期分层等预后评估具有极大的临床意义。因此寻找新的判断预后及治疗的方法成为当今MM研究重点和热点,寻找对MM有效的判断预后的标志物及新的治疗靶点具有重要的临床意义,新的特征性靶分子可能为寻找MM的治疗及预后评估的新途径提供可能。研究表明表观遗传与肿瘤发生、发展的关系密切,表观遗传受非编码RNA(ncRNA)调控,随着对ncRNA的认识的深入,人们越来越关注属于ncRNA范畴内的长链非编码RNA所具有的重要调控功能。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度超过200nt的RNA分子,不具备编码蛋白的能力或者只能编码很短的多肽,可通过与DNA、RNA、蛋白质等分子的互相作用,在多个水平发挥极为重要的调控功能。大量研究证明lncRNA广泛参与调控人类生长发育和细胞的增殖、凋亡、周期等正常的生理活动,也与心血管疾病、神经退行性疾病及癌症等的发生具有相关性。尤其发现lncRNA与多种肿瘤的发生、发展以及患者的预后及治疗效果评价之间关系密切,因此研究lncRNA在肿瘤发生、发展过程中的作用及其相应的机制非常重要,本课题组前期通过最新的生物学信息方法,整合大通量数据库,筛选出了可能与多发性骨髓瘤患者预后相关的lncRNA,分别是CRNDE、PMS2P3和LOC400657,但lncRNA CRNDE、PMS2P3和LOC400657在MM中尚无相关报道。方法本研究选取的MM骨髓样本均来自于在我院接受PAD方案治疗的MM患者。我们将120例MM患者的骨髓瘤细胞作为实验组,将10例正常人骨髓浆细胞作为正常健康对照组,应用qRT-PCR方法检测目的lncRNACRNDE、PMS2P3和LOC400657的表达水平并应用Kolmogorov-Smirnov进行正态性检验。以检测的目的lncRNA的原始表达量的中位数为界值,即将120例MM患者骨髓瘤细胞中目的基因的表达水平由高到低排列,以目的lncRNA的中位表达量作为界值,将MM患者划分为高、低目的lncRNA表达水平组,每组60例患者,并结合患者的临床病理资料,分析两组间的年龄、血钙、性别、血红蛋白、肌酐、血小板、乳酸脱氢酶、β2微球蛋白和染色体检查等相关指标的差异;并结合接受硼替佐米+表柔比星+地塞米松(pad)化疗后2疗程和4疗程的患者的疗效进行分析;通过随访患者的疾病无进展生存时间(pfs)和总体生存时间(os),探究目的lncrna的高低表达水平与mm患者预后的相关性。我们应用干扰sirna下调骨髓瘤细胞系rpmi-8226、u266中crnde的表达水平,通过细胞增殖、凋亡、周期等细胞功能实验研究crnde对于mm细胞生物功能的影响。结果(1)正态性分布检验分析发现目的基因的表达量不成正态分布(k-s检验,p<0.05),对目的基因的表达量进行对数处理后呈正态分布(k-s检验,p>0.05)。我们发现三个目的lncrnacrnde、pms2p3和loc400657在mm患者的骨髓瘤细胞中均呈现上调表达:相较于正常对照,lgcrnde的相对表达量为实验组2.432±0.029vs.正常对照组0.144±0.029(p<0.01);lgpms2p3的相对表达量为实验组2.135±0.033vs.正常对照组0.169±0.038(p<0.01);lgloc400657的相对表达量为实验组2.410±0.033vs.正常对照-0.027±0.057(p<0.01)。(2)结合mm患者的临床病理指标分析结果显示,高表达crnde的患者相较于低表达crnde的患者,在iss分期(p=0.027)、血小板(p=0.032)、p53缺失(p=0.032)、13q14.3缺失(p=0.009)及1q21扩增(0.026)方面存在差异;高表达pms2p3的患者相较于低表达pms2p3的患者,乳酸脱氢酶(p=0.043)、p53缺失(p=0.032)及13q14.3缺失(p=0.003)方面存在差异;高表达loc400657的患者相较于低表达loc400657的患者,β2-mg(p=0.036)及13q14.3缺失(p=0.025)方面存在差异。(3)疗效分析结果显示crnde、pms2p3和loc400657在mm患者的骨髓瘤细胞中的表达水平与患者接受2个疗程及4个疗效pad治疗方案的疗效无显著相关性。(4)预后因素分析显示mm患者的骨髓瘤细胞中高表达crnde的患者,其pfs(p=0.035)、os(p=0.030)相较于低表达crnde的mm患者要差。多因素分析并未发现crnde在骨髓瘤细胞中的表达水平能够作为判断mm患者os的独立预后因素(p=0.140)。(5)细胞功能实验结果表明,下调crnde在骨髓瘤细胞中的表达,能够显著抑制细胞的增殖,使细胞凋亡增加,并能够导致g0/g1细胞周期阻滞。结论本研究发现,相较于正常人群,crnde、pms2p3和loc400657在mm患者骨髓瘤细胞中显著上调表达。骨髓瘤细胞中高表达crnde的mm患者的pfs及os更短,但多因素分析未发现crnde高表达可作为预测mm预后的独立危险因素,为crnde、pms2p3和loc400657应用于mm的进一步深入研究提供理论依据,为寻找mm潜在的特征性靶向分子提供思路。下调骨髓瘤细胞系rpmi-8226、u266细胞中crnde的表达后可抑制骨髓瘤细胞增殖并促进骨髓瘤细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期,提示CRNDE可能通过影响细胞增殖与凋亡促进MM的发生、发展。这些新的研究发现将为今后深入研究MM分子机制及治疗新靶点提供新思路。