【摘 要】
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目的:检测肾透明细胞癌中METTL3和GLI1的表达,探讨METTL3和GLI1之间的关系及它们在肾透明细胞癌中发挥的作用。研究方法:1、通过生信分析、组织验证、细胞验证三个维度,验证METTL3在肾透明细胞癌中的表达情况和预后情况。2、用si RNA敲低肾癌细胞系786-O,769-P中METTL3的表达,通过CCK8实验、Annexin V-FITC/PI凋亡实验、Transwell侵袭实验、
【基金项目】
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辽宁省重点研发计划联合计划（课题编号:2020JH 2/10300137）； 345人才计划（M0716）；
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目的:检测肾透明细胞癌中METTL3和GLI1的表达,探讨METTL3和GLI1之间的关系及它们在肾透明细胞癌中发挥的作用。研究方法:1、通过生信分析、组织验证、细胞验证三个维度,验证METTL3在肾透明细胞癌中的表达情况和预后情况。2、用si RNA敲低肾癌细胞系786-O,769-P中METTL3的表达,通过CCK8实验、Annexin V-FITC/PI凋亡实验、Transwell侵袭实验、划痕实验探究敲低METTL3对肾癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡表型的影响。3、结合文献,运用差异表达分析、预后分析、表达相关性分析和m6A位点预测等生信方法,锁定METTL3的靶基因。通过qRT-PCR、Western blot、生信分析验证筛选出的差异基因的表达以及对预后的影响。4、通过回复实验、RIP实验等方法证明METTL3可以与GLI1结合,对GLI1表达的影响。结果:1、综合生物信息学验证、组织学验证和细胞系验证,METTL3在肾癌中呈现高表达,且高表达患者的预后差于低表达患者,METTL3在肾透明细胞癌中起到促癌基因的作用。2、在CCK8细胞增殖实验中,敲低METTL3显著抑制了786-O,769-P细胞的增殖水平;在Annexin V-FITC/PI凋亡实验中,敲低METTL3显著促进了786-O,769-P细胞的凋亡;在Transwell侵袭实验中,敲低METTL3显著抑制了786-O,769-P细胞的侵袭能力;在划痕迁移实验中,敲低METTL3显著抑制了786-O,769-P细胞的迁移能力;综上,METTL3在肾癌细胞中有促进增殖、侵袭、迁移,抑制凋亡的作用。3、根据一篇已发表文献获取80个METTL3候选靶基因列表;利用TCGA数据库,经过对着80个基因的差异表达分析,筛选出17个log FC＞1且显著性水平P＜0.001的靶基因;通过对17个基因的预后分析,筛选出11个P＜0.05且该基因高表达组预后差于低表达组的基因;通过对11个基因进行与METTL3表达相关性分析,筛选出4个显著性水平P＜0.05且相关性系数大于0.3的基因;通过SRAMP网站预测m6A位点和在NCBI查询基因信息,筛选出GLI1为METTL3潜在靶基因。4、通过生信分析、组织验证、细胞验证三个维度,证实了GLI1在肾透明细胞癌中高表达且高表达患者预后差,起到促癌基因的作用。敲低METTL3在细胞中的表达后,GLI1表达量也会跟着显著下调,说明METTL3和GLI1的表达呈现正相关关系。通过敲低METTL3后过表达GLI1,发现GLI1可以回复因METTL3表达量减少所带来的的增殖能力和迁移能力的减弱。最后,通过RIP实验证实METTL3可以与GLI1结合。结论:METTL3在肾透明细胞癌中高表达,且高表达的患者预后差。METTL3在肾癌细胞中有促进增殖、侵袭、迁移,抑制凋亡的作用。GLI1在肾透明细胞癌中高表达且高表达患者预后差,METTL3可以与GLI1结合,促进GLI1表达,进而促进肾透明细胞癌的发展。
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