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研究背景和目的肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)起源于肾实质泌尿小管上皮细胞,发生率约占成人所有恶性肿瘤的3%,80%～90%RCC病理类型为肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC),与其他类型肾癌相比,ccRCC 具有更高的转移率和复发率。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)可通过对蛋白编码基因表达的表观遗传调控介导包括RCC在内的多种恶性肿瘤的发生和发展。反义长链非编码 RNA(Antisense long non-coding RNA,AS lncRNA)是lncRNA的一种类型,由蛋白编码基因所在DNA链的反义链转录生成。ZNF710-AS1 是与蛋白编码基因 ZNF710(Zinc finger protein 710,锌指蛋白 710)相对应的AS lncRNA。在人类15号染色体DNA上,ZNF710-AS1基因序列完全重叠在 ZNF710 基因 5’端与 3’端之间。ZNF710 与 ZNF366(Zinc finger protein 366,锌指蛋白366)均含有11个C2H2型锌指结构,且两者蛋白锌指结构区域氨基酸序列同源性达78%;ZNF366与转录因子ERα(Estrogen receptor α,雌激素受体α)通过锌指结构相互结合,抑制雌激素诱导基因GREB1(Growth Regulation by Estrogen in Breast cancer 1,乳腺癌雌激素调控基因1)的转录,最终通过阻滞TGFβ/Smad信号通路抑制肿瘤细胞生长。该研究旨在探索lncRNA ZNF710-AS1与ZNF710对RCC肿瘤生长的影响以及lncRNA ZNF710-AS1对ZNF710基因表达的调控作用。研究对象和方法1.于本院收集5对人ccRCC和癌旁正常组织标本进行RNA-seq(RNA-sequencing,全转录组测序),筛选在ccRCC中表达失调的mRNA和与之对应的AS lncRNA;2.使用 Strand-Specific RT-qPCR 技术验证 mRNA ZNF710 和 AS lncRNA ZNF710-AS1在ccRCC和癌旁正常组织标本中的表达水平;3.使用卡方检验对ZNF710 RNA水平与ccRCC各项临床病理特征进行相关性分析;4.对TCGA数据库中ZNF710-AS1和ZNF710在ccRCC中RNA表达水平与ccRCC患者预后进行相关性分析;5.通过转染重组质粒分别使ZNF710-AS1和ZNF710在RCC细胞中过度表达;6.采用CCK-8、集落形成实验、流式细胞术等技术分别检测ZNF710-AS1与ZNF710对RCC细胞增殖及凋亡的影响;7.使用Western blot(蛋白质印迹技术)分别检测ZNF710-AS1与ZNF710对RCC细胞中细胞周期蛋白Cyclin B1表达量的影响;8.采用RNA荧光原位杂交技术(FISH)检测ZNF710-AS1在RCC细胞中的分布;9.使用 RT-qPCR 和 Western blot 检测 ZNF710-AS1 对 ZNF710 基因表达水平的影响;10.采用Rescue实验验证ZNF710-AS1与ZNF710之间的关系。研究结果1.ccRCC组织中ZNF710-AS1表达水平显著上调;2.ccRCC组织中ZNF710 RNA表达水平显著下调;3.ZNF710 RNA水平与ccRCC的病理分级、肿瘤直径和TNM分期具有显著相关性,而与是否发生淋巴结转移或远处转移无关;4.ccRCC组织中ZNF710-AS1表达水平与患者预后差呈正相关;5.ccRCC组织中ZNF710 RNA表达水平与患者预后差呈负相关;6.ZNF710-AS1过度表达促进RCC细胞增殖,抑制细胞凋亡;7.ZNF710过度表达抑制RCC细胞增殖,促进细胞凋亡;8.lncRNA ZNF710-AS1主要分布在RCC细胞的细胞质中;9.lncRNA ZNF710-AS 1 抑制 ZNF710 基因的表达。研究结论1.ZNF710-AS1和ZNF710表达水平可作为判断RCC患者预后的重要指标;2.ZNF710-AS1通过抑制ZNF710的表达促进RCC细胞增殖,并抑制RCC细胞凋亡;3.ZNF710蛋白可能通过抑制转录因子ERα的转录激活功能使RCC中GREB1基因表达下调;4.ZNF710-AS1和ZNF710可能成为RCC新的治疗靶点。