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鱼藤素是一种天然的鱼藤酮类化合物,其抗瘤谱广泛,对肺癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、前列腺癌、头颈癌等多种肿瘤具有良好的抗肿瘤效应。目前鱼藤素的应用受限于其帕金森样神经毒性,然而目前针对鱼藤素神经毒性的研究较少,因此,对鱼藤素的神经毒性进行研究,寻找合适的降低鱼藤素神经毒性的方法尤为迫切。L-肌肽是一种内源性二肽,其抗氧化作用和抑制α-突触核蛋白(α-synuclein,α-SYN)聚集的作用能有效保护神经元细胞,对延缓帕金森病(Parkinson’s disease,PD)进程具有重要意义。近年来多项体内外研究报道L-肌肽具有抗肿瘤作用,因此,联合应用L-肌肽和鱼藤素,可能起到协同抗肿瘤作用以及降低鱼藤素神经毒性的作用。本文的研究内容如下:(1)CCK-8法测定鱼藤素对SH-SY5Y细胞的增殖的抑制作用;采用流式细胞术检测处理后各组细胞内的凋亡率和活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平,验证鱼藤素是否通过氧化应激诱导细胞凋亡:采用分光光度法测定caspase-3活化程度,进一步验证鱼藤素对SH-SY5Y细胞凋亡的诱导作用。(2)检测不同浓度L-肌肽对SH-SY5Y细胞增殖的影响;选取合适浓度的L-肌肽,CCK-8法测定L-肌肽和鱼藤素共同处理对SH-SY5Y细胞增殖的影响;流式细胞术检测L-肌肽和鱼藤素共同处理对SH-SY5Y细胞凋亡和ROS水平的影响,验证L-肌肽是否通过其抗氧化活性发挥神经保护作用。(3)采用Western-blot/Q-PCR法在分子水平上(蛋白/mRNA水平)检测L-肌肽和鱼藤素作用后对SH-SY5Y细胞的目的基因α-SYN、parkin表达量的影响。(4)选取H1299细胞为肿瘤细胞模型,采用Chou-Talary法评价L-肌肽和鱼藤素联合用药的抗肿瘤活性。本文结果如下:(1)鱼藤素呈浓度依赖性抑制SH-SY5Y细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与氧化应激有关。(2)L-肌肽对鱼藤素诱导的神经细胞凋亡和抑制增殖具有一定程度的保护作用;L-肌肽共处理组细胞的ROS水平显著降低,提示L-肌肽可能通过其抗氧化活性发挥保护作用。(3)鱼藤素可能不是通过上调α-SYN诱导帕金森样神经毒性,其神经毒性可能与下调parkin基因表达相关。L-肌肽可能通过减轻鱼藤素对parkin基因的抑制作用,从而保留了 parkin蛋白的神经保护作用。(4)鱼藤素和L-肌肽联合应用具有协同抑制H1299细胞增殖效应,且在本实验使用剂量内内,协同效应与两药联合使用的比例相关性不大。本文结论为:鱼藤素可能通过氧化应激诱导神经细胞凋亡导致帕金森样神经毒性,联合应用L-肌肽不仅表现出协同抗肿瘤效应,也在一定程度下降低鱼藤素的神经毒性,且减毒作用与L-肌肽上调parkin表达和抗氧化活性相关。