玉米高F值寡肽的制备及生理功能研究

来源 :济南大学 | 被引量 : 15次 | 上传用户:jiangyingzhou
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玉米黄粉蛋白是湿法生产玉米淀粉过程中产生的一种下脚料,含有60%以上蛋白质,由于其口感不佳目前主要应用于饲料,利用价值不高,通过酶解法水解玉米黄粉可制备高F值寡肽,高F值寡肽具有抗疲劳、解酒、治疗肝性脑病等生物活性。实验利用复合蛋白酶对玉米黄粉进行水解,利用单因素实验和响应面实验探究了最佳水解条件为:pH11.0,温度55.00℃,底物浓度为112g/L,碱性蛋白酶和中性蛋白酶最佳配比为5:1,E/s为48000U/g,作用时间为120min,在此条件下玉米黄粉水解度为30.23%,模型的预期值为30.84%。采用复合酶水解可提高玉米黄粉蛋白水解度,且工艺简单。实验探究了复合酶法水解玉米黄粉蛋白,实验表明:采用多酶复合水解法和单酶分步水解法,其蛋白水解度及可溶性蛋白含量相当。碱性蛋白酶和中性蛋白酶复合最佳配比为5:1、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合最佳配比为6:5、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合最佳配比为1:1,碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合最佳配比为4:1:1。多酶复合水解效率高,具有较大优势。实验探究了金属离子对碱性蛋白酶水解效果的影响,实验表明:表明Ba2+、Li+对碱性蛋白酶水解作用影响不大,Mg2+、Mn2+、Ca2+、K+对碱性蛋白酶水解玉米黄粉蛋白有促进作用,Cu2+、Zn2+对碱性蛋白酶水解玉米黄粉蛋白有抑制作用。Mg2+4mmol/L、Mn2+4mmol/L、Ca2+4mmol/L、K+6mmol/L对碱性蛋白酶水解玉米黄粉蛋白促进作用最大,Cu2+、Zn2+浓度越大对碱性蛋白酶的抑制作用越大。实验采活性炭对玉米黄粉水解液进行吸附制备高F值寡肽,以OD208/OD269为指标,通过单因素实验和响应面法对活性炭吸附条件进行了优化,得到最优条件为吸附pH1.97、吸附固液比1:8.84、吸附时间2.92h。此时OD208/OD269为11.9857。吸附后水解液通过过滤,分级超滤,阴阳离子交换进行纯化精致,制备得到了高F值寡肽晶体。实验测定了经过活性炭吸附、离子交换、分级超滤后所得到高F值寡肽溶液过程中各指标,其中酶解液中剩余酶活为16.50U/mL、水解残渣中剩余酶活为19.46U/g,超滤后所得产品分子量为624-120Da。寡肽的F值为21.92。玉米黄粉水解液中氨基氮含量为13.12mg/mL,吸附后水解液中氨基氮含量为5.04mg/mL,离子交换后水解液氨基氮含量为3.83mg/mL,超滤后水解液中氨基氮含量为2.71mg/mL。其中总蛋白含量为玉米黄粉中为0.948g/g,玉米黄粉水解液中65.63mg/mL,回收率为60.16%,吸附后水解液蛋白含量为22.604mg/mL,回收率为15.86%,离子交换后水解液中总蛋白含量为17.675mg/mL,产品回收率为12.40%,超滤后水解液蛋白含量为9.625mg/mL,回收率为6.75%。通过制备的玉米高F值寡肽灌胃小鼠进行解酒和抗疲劳实验研究,实验表明低、中、高剂量组比对照组醉酒时间延长30.06%、39.35%、49.97%,醉酒率降低20%、40%、80%,解酒时间缩短12.16%、22.32%、23.04%,死亡率降低50%、50%、100%,血清ALT酶活降低16.03%、24.34%、26.71%,血清AST酶活降低27.65%、34.40%、34.81%,肝组织MDA含量降低26.45%、32.23%、33.06%,肝组织SOD活性升高2.83%、5.37%、9.28%,肝组织CAT活性升高4.78%、12.32%(p<0.05)、14.86%,表明玉米高F值寡肽具有解酒功能。低、中、高剂量组比对照组小鼠游泳时间延长27.69%、106.16%、138.47%,肝糖原高10.01%、35.77%、101.43%,肌糖原高62.63%、118.18%、178.79%,血尿素降低3.94%(p<0.001)、12.81%(p<0.05)、37.60%(p<0.01),血乳酸降低1.26%(p<0.05)、9.97%、15.44%,说明玉米高F值寡肽具有调节体内代谢抗疲劳作用。通过实验为玉米黄粉制备高F值寡肽,提高玉米加工的附加值,推进玉米深加工的进展提供了实验基础。
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