根瘤菌处理对甘草品质的影响及其提取物抑菌效果的比较

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甘草是一种常见的药食同源豆科植物,具有较高的药用和营养价值,而新疆作为我国人工栽培甘草的主产区之一,如何更好地利用和推广甘草产业是目前亟需解决的重要问题。本研究将根瘤菌接种于乌拉尔甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)、光果甘草(Glycyrrhiza glabra L.)和胀果甘草(Glycyrrhiza inflata Bat.)的种子中,形成甘草-根瘤菌共生体系,分析其种子发芽率、生长情况、主要物质组分含量、主要活性成分含量及甘草酸、甘草苷生物合成途径中关键酶基因表达情况,并比较不同溶剂甘草提取物的抑菌效果,以期为甘草的开发及生产提供理论依据。主要结果如下:(1)将3种根瘤菌接种于3种甘草种子中,考察其对3种甘草种子萌发的影响。测定结果表明,接种3种根瘤菌对3种甘草种子萌发促进效果明显其发芽率分别为78.63%、71.67%、73.34%,其中78菌株处理对3种甘草种子萌发促进效果最为明显。3种根瘤菌在不同程度上均能促进甘草幼苗的生长,对其抗氧化酶活性、渗透性调节物质、皂苷和黄酮含量也均具有显著影响(P<0.05)。(2)采用凯氏定氮法、残余法、硝基水杨酸比色法、苯酚-硫酸法、紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法分别测定3种根瘤菌处理后甘草中粗蛋白、粗脂肪、硝态氮、总糖、皂苷、黄酮和甘草酸、甘草苷、甘草素、异甘草苷、异甘草素的含量。结果表明根瘤菌对甘草中初生及次生代谢产物的积累均具有促进作用,提高了甘草粗蛋白、粗脂肪、硝态氮、多糖、皂苷、黄酮的含量。70、77、78菌株处理3种甘草后5种主要活性成分含量与空白组间均存在显著性差异(P<0.05)。(3)利用实时荧光定量PCR仪测定根瘤菌处理后乌拉尔甘草中甘草酸和甘草苷的合成途径中关键酶的基因表达量。结果表明:根瘤菌可以上调甘草根部的β-AS、SQS、HMGR、CHI、CHS基因的表达。70、77、78菌株处理组β-AS基因相对表达量值分别是空白组的0.03、0.31和1.91倍,77、78株根瘤菌处理组SQS基因相对表达量与空白组间均存在显著性差异(P<0.05)。70、78菌株处理组HMGR基因相对表达量值分别为空白组的3.11、18.12倍。70、77、78菌株处理组CHS基因相对表达量值分别为空白组的3.67、3.08和13.12倍。77、78株处理组CHI基因相对表达量与空白组间均存在显著性差异(P<0.05),表明具有一定的正向调节作用。(4)通过不同溶剂对甘草根部进行提取,采用牛津杯法测定3种甘草提取物的抑菌效果。结果表明,不同溶剂的甘草提取物均能够抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌的生长,能够增大细菌的细胞膜通透性,破坏细胞壁,降低菌体蛋白质含量。甘草提取物抑菌能力大小为甘草醇提物>甘草碱提物>甘草水提物。
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