SiRNA阻抑Survivin基因表达对肝癌细胞细胞周期影响的研究

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目的:采用RNAi技术抑制人肝癌HepG2细胞中Survivin基因表达,观察小分子干扰RNA (siRNA)对肝癌细胞周期,细胞凋亡的影响,并初步探讨其对肝癌临床治疗的意义,为治疗肝癌提供可能的思路。方法:构建针对人肝癌HepG2细胞化学合成survivin-siRNA采用脂质体将siRNA导入肝癌细胞系以后进行如下的一系列研究:(1)取HepG2细胞将其接种到6孔板内后共分成低浓度转染组(0.8ug),中浓度转染组(1.6ug),高浓度转染组(3.2ug),同时以200ulOPTI-MEM I培养基对照表达载体pshRNA-survivin-NC 3.2ug为阴性对照组。(2)将HepG2细胞接种于96孔板中,4组分别为siRNA干扰组、siRNA干扰对照组、未转染的对照组、空白载体组,通过对照以观察各个组别的干扰效果。作用48h后收集细胞,MTT法测量细胞生长情况,应用流式细胞仪分析siRNA对肝癌细胞增殖周期的影响,并同时用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:通过Western印迹的方法检测survivin基因被siRNA所抑制的效果,siRNA干扰对照组和空载体组survivin的表达没有受到抑制,和未转染对照组相比,未观察到明显的差异;而同时与对照组相比,干扰组survivin基因的表达受到了明显地抑制。由此可以得出结论说明细胞中survivin的表达可以被RNAi载体构建后有效地抑制。通过MTT检测survivin基因沉默对HepG2的细胞周期影响结果显示,经survivin基因干扰后的HepG2细胞0~72h相比同时间点的对照组细胞,吸光度A值较低;尤其是24、48小时组吸光度的A值相对对照组降低更为明显。P值<0.05。结论:siRNA转染能够抑制细胞survivin基因表达,使人肝癌细胞株HepG2细胞阻滞于G2/M期。诱导肝癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。
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