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目的: 原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，以手术为首选的肝癌综合治疗，已经达成了共识。近些年来，研究和临床试验证明了三氧化二砷(As2O3)对实体肿瘤具有抑制作用，特别是对肝癌等消化道肿瘤作用明显。随着对As2O3的作用机制的进一步研究，研究者们发现，As2O3抗肿瘤的主要作用机制之一，在于其诱导肿瘤细胞凋亡。 miRNA是一组调节靶基因表达的小片段、非编码RNA分子，调节裂解mRNA或抑制翻译过程，在肿瘤细胞内功能重要，在对肝癌miRNA的筛查中，发现miR-24和miR-27a表现出差异性表达。在对As2O3处理后的肝癌HepG2细胞系，进行Microarray的Mima的检测，发现miR-24，miR29a等出现两倍以上的上调改变。表明miR-24可能在As2O3的抗肿瘤机制中起到一定作用，其与促凋亡可能存在联系。 bcl-2l11即Bcl-2相互作用细胞死亡调节蛋白(Bim)，bcl-2l11诱导AKT磷酸化可能是As2O3诱导凋亡发生的核心元素;Sestrin1是p53特定的靶基因，Sestrin1蛋白通过激活AMP敏感蛋白激酶(AMPK)，从而抑制mTOR(mTOR可正向调节细胞生长)，调控凋亡。通过Targetscan等预测软件预测后，我们发现miR-24的目的基因高度可能为bcl-2l11和或Sestrin1基因，根据以上研究，推断bcl-2l11和或Sestrin1基因及产物，可能在As2O3对肝癌HepG2细胞系的凋亡作用中起到重要作用。As2O3对于肝癌的治疗是否干扰miR-24，miR-24是否调节bcl-2l11和或Sestrin1基因及其产物，最终诱导瘤细胞凋亡，有待研究。 本次研究将通过不同浓度As2O3处理肝癌细胞系，观察As2O3对肝癌细胞系的作用，检验miR-24发生何种程度的改变及bcl-2l11和Sestrin1是否发生改变;再通过构建过表达的miR-24的细胞系，观察肝癌细胞系的增值及凋亡能力，检测bcl-2l11和Sestrin1是否发生改变。通过以上实验及结果，进一步探讨，As2O3对肝癌细胞系的作用机制，以及miR-24在肝癌发生发展及治疗过程中的作用，miR-24对bcl-2l11和Sestrin1是否起到调节作用而诱导凋亡抑制肿瘤。 方法: 分别使用2μmol/LAs2O3和4μmol/LAs2O3处理HepG2和Huh7肝癌细胞系，通过MTT、流式细胞术等细胞生物学实验观察，对比空白对照组不同浓度As2O3处理的肝癌细胞系，的增值及凋亡能力，同时采用RT-PCR技术检验miR-24发生何种程度的改变，应用western-blot技术检测bcl-2l11和Sestrin1是否发生改变;再根据miR-24成熟体hsa-miR-24序列化学合成miR24模拟物hsa-miR-24-mimics，脂质体介导mimics瞬时转染肝癌细胞株，构建过表达的mir-24的细胞系，RT-PCR检测确定转染有效后，通过MTT、流式细胞术等细胞生物学实验观察，对比空白对照组、脂质体组和mimics-NC转染组，肝癌细胞系的增值及凋亡能力，应用western-blot技术检测bcl-2l11和Sestrin1是否发生改变。通过荧光素酶酶报告系统法观察miR-24对bcl-2l11和Sestrin1是否起到调节作用。与通过以上实验及结果，进一步探讨，As2O3对肝癌细胞系的作用机制，以及miR-24在肝癌发生发展及治疗过程中的作用，miR-24对bcl-2l11和Sestrin1是否起到调节作用而诱到凋亡抑制肿瘤。 结果: 2μmol/LAs2O3和4μmol/LAs2O3处理HepG2和Huh7肝癌细胞系，对比空白对照组，细胞增值受到抑制及凋亡明显，miR-24表达相比空白对照组明显增高，bcl-2l11和Sestrin1表达对比空白对照组也明显增高。成功构建过表达的miR-24的细胞系，对比空白对照组、脂质体组和mimics-NC转染组，肝癌细胞系的增值能力下降及凋亡能力增强，bci-2l11和Sestrin1的表达，前三组无明显改变，转染细胞株表达过表达。荧光素酶酶报告系统法检测提示miR-24对bcl-2l11和Sestrin1起到调节作用。 结论: 1、As2O3对肝癌细胞系的作用，具有促凋亡，抑制细胞增殖的影响，具有一定得浓度依赖性。 2、As2O3对肝癌细胞系促凋亡作用中，miR-24过表达，bcl-2l11和Sestrin1过表达。 3、筛选并建立过表达的miR-24基因的肝癌细胞株。应用体外细胞生物学研究方法，miR-24基因可能对肝癌细胞促凋亡和抑制增殖的影响，促进了bcl-2l11和Sestrin1的形成和表达。