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目的: Gankyrin是一个新的癌基因，最早在肝癌组织发现。Gankyrin编码的蛋白含有226个氨基酸，由7个锚蛋白(ankyrin)重复序列组成，在结构上高度保守，分子量约为25kDa。研究表明，肝癌、结肠癌、胰腺癌等多种恶性肿瘤组织中gankyrin蛋白高表达，并且与肿瘤的恶性程度密切相关，显示gankyrin在肿瘤发生发展中起到重要作用。 尽管gankyrin在不少恶性肿瘤中高表达，然而现有的研究大部分集中在gankyrin与肝癌的发生、发展、预后及耐药等方面，在胃癌等其它肿瘤的研究还不够深入，没有形成体系，缺少gankyrin与胃癌、头颈部肿瘤、肺癌、大脑胶质瘤等恶性肿瘤关系的研究。所以，本实验拟深入探讨gankyrin对胃癌细胞生物学行为和化疗敏感性的影响及作用机制，对胃癌的预防、诊断、预后判断及寻找新的药物靶点都具有重要意义。 方法: 1、采用Western blot法和免疫组织化学检测胃癌和癌旁正常组织中gankyrin的表达，同时评价gankyrin与临床特征的关系。 2、RT-PCR和Western blot检测4种胃癌细胞系（SGC-7901、MGC-803、BGC-823、HGC-27）中gankyrin的蛋白及mRN表达水平。 3、使用脂质体法将gankyrin的真核表达载体转染入BGC-823细胞，将gankyrin特异siRNA表达质粒转染入胃癌HGC-27细胞，G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。 4、通过流式细胞术、MTT实验、软琼脂集落形成实验等方法观察gankyrin在胃癌细胞系增殖中的作用。 5、裸鼠皮下成瘤实验评估gankyrin表达改变后，对胃癌细胞的体内成瘤能力及移植瘤生长的影响。 6、Western blot及RT-PCR检测gankyrin上调、下调表达后胃癌细胞中细胞周期相关分子(cyclinD1、cyclinE、PCNA、Rb、p53和p27)mRNA及蛋白表达的变化;Western blot检测上述转染细胞中PI3K/AKT通路相关蛋白表达情况(PI3K、AKT、磷酸化PI3K和磷酸化AKT)。 7、MTT法检测gankyrin与胃癌细胞化疗药物敏感性的关系，Hoechst及AV/PI法检测细胞凋亡，Western blot检测凋亡蛋白caspase3和capase9的表达情况。 结果: 1、Gankyrin在胃癌细胞系和胃癌组织中存在不同程度的表达。Gankyrin在胃癌组织的阳性表达率100.00％(78/78)，明显高于癌旁正常组织[癌旁正常组织的阳性表达率为62.82％(49/78)，P＜0.01]。各胃癌细胞系(SGC-7901、MGC-803、BGC-823和HGC-27)均有表达gankyrin，其中HGC-27表达水平最高，BGC-823最低。 2、Gankyrin对胃癌细胞体内外生长增殖能力的影响。转染gankyrin正义表达载体的胃癌BGC-823细胞较亲本细胞生长速度显著加快，进入S期的细胞比例增加，胃癌细胞裸鼠皮下成瘤能力及集落形成能力明显增强;而通过siRNA特异下调gankyrin表达的HGC-27胃癌细胞的生长能力比亲本细胞明显减弱，处于S期的细胞显著减少，细胞集落形成能力显著下降，裸鼠皮下移植瘤的生长也明显受到抑制。 3、Gankyrin调节细胞周期相关分子及对PI3K/AKT通路相关蛋白的影响。过表达gankyrin的BGC-823细胞中，细胞周期相关分子cyclinE、cyclin D1和PCNA表达上调，而p27、p53和Rb表达下降。当通过siRNA下调HGC-27细胞gankyrin表达后，cyclin E、cyclin D1和PCNA表达明显下降，而p27、p53和Rb则表达升高。siRNA下调gankyrin的表达之后，PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT表达减少;而过表达gankyrin后，PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT表达增加。 4、Gankyrin与化疗药物敏感性的关系。siRNA下调HGC-27细胞gankyrin的表达与顺铂、5-Fu作用，细胞的IC50减少，凋亡细胞数增多，凋亡蛋白caspase3和caspase9表达增加;而转染gankyrin正义载体的胃癌BGC-823细胞与顺铂、5-Fu作用，细胞的IC50升高，凋亡细胞数减少，凋亡蛋白caspase3和caspase9表达下降。 结论: 1、胃癌组织gankyrin的表达明显高于癌旁正常组织，四种胃癌细胞系（SGC-7901、MGC-803、BGC-823和HGC-27）不同程度的表达gankyrin。 2、Gankyrin与胃癌细胞体内、外的生长增殖相关。 3、Gankyrin能通过调节细胞周期相关分子来加速细胞周期G1/S进展，从而影响胃癌细胞的生长增殖能力。Gankyrin可能通过激活PI3K/AKT通路影响胃癌细胞的生长和增殖。 4、Gankyrin可能通过促进细胞凋亡来增加胃癌细胞对5-Fu及顺铂的化疗敏感性。