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本研究以05版药典一部规定的益母草(Leonurus japonicus Houtt)药材为研究材料,研究益母草种质的遗传多样性,旨在为益母草的种质资源研究与保护、合理利用奠定初步的理论基础。本文对15份益母草种质资源进行了形态学、RAPD分子标记和代谢产物、染色体核型这四方面的分析,研究结果表明:
1.对益母草种质的形态学性状进行分析,结果表明株高、主茎粗两个形态学性状差异均达到极显著水平,但是单株鲜重和干重两个形态学性状差异不显著。
2.利用RAPD标记,从100个引物中共筛选出18个引物,对15份来源地不同的益母草种质的基因组DNA进行随机引物PCR扩增,并进行聚类分析。结果共扩增出120条谱带,平均每个引物扩增出7条谱带,其中多态性谱带109条,平均多态性百分率为90.83％;Shannon指数的范围在0.49～2.52之间,平均值为1.81;益母草种质的遗传距离为0.105～0.562,平均遗传距离为0.302;建立了15份益母草种质遗传差异的关系树状图。这15份益母草种质可以划分为A、B、C三类。试验结果表明,这15份益母草种质间存在一定的遗传差异,但遗传差异与其地理分布关系不大。
3.本实验检测了15份益母草材料中盐酸水苏碱和芦丁的含量,其含量分别在0.438％～1.753％和0.3375％～0.6150％之间变化。由此可知,益母草不同来源地盐酸水苏碱和芦丁含量差异很大,益母革种质间存在着丰富的遗传多样性。其中眉山市洪雅县、雅安市雨城区、眉山市仁寿县、乐山市市中区、眉山市彭山县、内江市威远县、乐山五通桥区、内江市中区、重庆市潼南县九地所产益母草按干重测定在水苏碱含量上大于1％,符合2005年版药典规定,能够作为药物在市场流通。
4.本研究首次在四川及重庆采集15个益母草样品进行染色体核型分析,得出不同益母草种质材料的染色体之间有某种程度的差异。益母草种质材料的核型公式多样,最长染色体:最短染色体(L:S)比值在1.62～2.16之间,核型不对称系数在52.91％～55.85％之间,呈现一定的遗传差异。
5.从本研究的结果来看,可以得出不同来源地益母草种质资源间存在遗传差异但是遗传差异与其来源地地理分布关系不大。