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第一部分体外实验实验一全反式维甲酸(ATRA)在细胞水平对walker-256肝癌细胞分化诱导实验研究:目的观察ATRA对walker-256肝癌细胞的分化诱导作用及促进其凋亡作用并探讨其作用机制。方法在肝癌细胞walker-256细胞株中加入不同浓度的ATRA,培养两天,ATRA对walker-256细胞的影响通过倒置显微镜进行细胞形态学观察; MTT比色法检测药物对Walker-256细胞的增殖抑制情况;流式细胞术分析不同DNA含量的细胞分布,计算细胞凋亡百分率;RT-PCR检测ATRA作用后对凋亡相关基因fas、bcl-2在RNA表达水平的调节;Western Blot在蛋白水平检测ATRA作用后对凋亡蛋白酶Caspase3、8的剪切活化作用。结果随着ATRA浓度的递增,walker-256细胞表现出细胞分化及凋亡的形态学上的改变;ATRA可明显抑制walker-256细胞增殖,增殖率取决于ATRA的浓度及时间;流式细胞仪分析在G1期前出现亚二倍体凋亡峰,凋亡细胞百分比在一定范围那随着浓度的递增而增加;观察发现,ATRA作用walker-256细胞后上调fas表达,并下调bcl-2的表达。结论ATRA对walker-256肝癌细胞具有分化诱导及促进其凋亡作用。第二部分体内实验实验一大鼠walker-256移植性肝癌模型的建立及肝动脉插管术目的研究应用Wistar大鼠建立Walker-256移植性肝癌模型充当肝癌动物模型的可行性,探讨大鼠Walker-256肝癌模型的建立方法、影像学检查及不同大小肿瘤对介入栓塞治疗疗效的影响。材料与方法将20只Wistar大鼠采用移植法建立Walker-256肝癌模型,于移植术后第11天行MRI检查,测量肿瘤体积(V1),经腹部切开术及胃十二指肠动脉逆行插管分别行TACE术。14天后再行磁共振检查以确定肿瘤体积(V2)。观察肿瘤体积V1、V2的差异性。TACE术前及术后14天行CT扫描,术中行DSA。结果8只大鼠经MRI检查证实均种植成功。肿瘤大小术前为87.3128±7.0225mm3 ,术后两周为608.9831±108.8147mm3,方差齐性检验证实方差不齐(P<0.01)。结论Wistar大鼠Walker-256肝癌模型生长方式与人肝癌生长方式相似,可用于肝癌肝动物模型的实验研究;常规化疗栓塞能够抑制移植性肝癌的生长。实验二ATRA经肝动脉给药对大鼠移植性肝癌的治疗作用目的评价ATRA结合肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗大鼠移植性肝癌的疗效。材料和方法将27只Wistar大鼠采用移植法建立Walker-256肝癌模型,于移植术后11天后行MRI检查,测量肿瘤体积(V1),再随机分成3组,A组:经肝动脉灌注ATRA0.1mg+MMC0.05mg+超液态碘油0.05ml+0.025mg明胶海绵粉;B组:MMC0.05mg+超液态碘油0.05ml+0.025mg明胶海绵粉。C组:经肝动脉灌注生理盐水0.2ml。14天后再行磁共振检查以确定肿瘤体积(V2),对三组间肿瘤生长率(V2/V1)进行比较。通过免疫组织化学方法检测von-Willebrand factor(Ⅷ因子)和Ki67在肿瘤组织中的表达,并对Ki67阳性肿瘤细胞进行光密度分析,对Ⅷ因子阳性内皮细胞进行微血管密度(MVD)(microvessel density,MVD)光密度分析。结果A、B、C三组间肿瘤生长速率不完全相同(p<0.01),肿瘤大小术前分别为88.26±3.47mm3,87.91±5.63 mm3,87.08±6.51 mm3;术后两周分别为389.77±54.13mm3,609.05±106.91 mm3,1116.64±120.96 mm3,两两比较各组间均有显著性差异(p<0.05);各组间肝表面转移灶及显微镜下瘤周0.5cm肝组织转移灶不完全相同,两两比较示A组与B组、A组与C组均存在显著性差异(p<0.01),而B、C两组无显著性差异(p>0.05); A、B、C三组间MVD不完全相同(p<0.05),分别为0.1819±0.0153,0.2208±0.0183,0.2290±0.0196,两两比较A组与B组、A组与C组均有显著性差异(p<0.05),而B、C两组间无显著性差异(p>0.05);各组间Ki67不完全相同(p<0.01),分别为0.2079±0.0363,0.3012±0.0593,0.3821±0.0480,两两比较各组间均有显著性差异(p<0.05)。结论ATRA具有抗肿瘤血管生成、抑制肿瘤细胞增殖、转移,促进肿瘤细胞分化及凋亡作用。