胰岛素对人乳腺癌细胞株化疗增效作用的体外研究

来源 :中国人民解放军军医进修学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:caolippp123456
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[目的]探讨用胰岛素提高肿瘤细胞生长代谢水平对化疗药物顺铂(DDP),阿霉素(ADM),氟尿嘧啶(5-Fu),足叶乙甙(Vp-16),盖诺(NVB)敏感性的影响和机制,为临床应用实验依据。[方法]以体外培养的人乳腺癌细胞株(MDA-MB-453)为靶细胞,以胰岛素作为代谢促进剂,运用四氮唑盐、直接细胞计数等方法观察化疗药物顺铂(DDP),阿霉素(ADM),氟尿嘧啶(5-Fu),足叶乙甙(Vp-16),盖诺(NVB)与胰岛素对MDA-MB-453细胞活力及细胞代谢,细胞总数等的影响。流式细胞仪检测不同加药处理组的周期时相变化情况。实验数据经SPSS 10.0统计软件处理,采用单因素方差分析,直线相关分析,以α=0.05为检验水准。[结果]1.胰岛素诱导浓度确定:在胰岛素0.5mu/ml至16.0mu/ml范围内,随着胰岛素浓度增加,对于MDA-MB-453的促进增殖作用逐步增强,之后随着浓度增大,其作用逐渐减弱。其中,8.0mu/ml及16.mu/ml胰岛素促进增殖作用明显高于其他浓度组(p<0.01)。2.胰岛素促进MDA-MB-453细胞增殖时间确定:结果表明,以胰岛素作用8-18小时之间,促进增殖作用最强,高于单纯细胞对照组及其他时间组(p<0.01)。3.细胞记数结果:提示在胰岛素浓度7.5mu/ml,作用9-18小时之间,有促进MDA-MB-453增殖作用,细胞记数结果与MTT相符合。4.化疗药物浓度确定:结果表明,化疗药物各浓度组与所测OD值之间存在直线相关关系。根据MTT试验结果,实验时分别选取抑制率为20%或30%的药物浓度(即IC20或IC30)作为加药浓度。ADM IC20=0.36ug/ml,5-Fu IC20=28.0ug/ml,DDP IC20=5.27ug/ml,Vp-16 IC30=70.09 ug/ml,NVB IC30=7.09 ug/ml。5.胰岛素诱导化疗药物增敏实验:各时间组抑制率结果表明在化疗前9-15小时加入胰岛素(浓度7.5mu/ml),可以提高化疗药物对于MDA-MB-453的抑制率。各浓度组抑制率结果提示:胰岛素浓度2.0-16.0mu/ml时,能够增强化疗药物ADM及5-Fu的敏感性,与对照组(单纯化疗药物)相比,差异具有统计学意义(P<0.01)。6.流式细胞检测结果:胰岛素浓度7.5mu/ml,结果提示:在胰岛素作用3-24小时间,随着作用时间的延长,S期细胞逐渐增多,该作用在处理18小时达到最大。胰岛素能够使S期细胞显著增加,与5-Fu和ADM等能够引起S期阻滞作用的化疗药物有协同作用。[结论]1.胰岛素有促进MDA-MB-453增殖作用,以胰岛素浓度8.0mu/ml及16.mu/ml,作用8-18小时之间该作用最为明显,胰岛素主要作用于细胞周期的S期。2.胰岛素具有化疗增效作用。诱导剂用药的时机选择是实现增效的关键,胰岛素在化疗前9-15小时加入,浓度2.0-16.0mu/ml,能够增加化疗药物对于MDA-MB-453的抑制率。其机制可能为:胰岛素能够使S期细胞增加,与5-Fu和ADM有协同作用。3.初步证实提高代谢水平后可以提高化疗药物的细胞毒作用。
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