目的 胃癌是目前我国死亡率最高的恶性肿瘤。胃癌的发生是一个多阶段的过程。尽管导致胃粘膜上皮细胞恶变的确切分子机制尚不清楚，但细胞内在的生死信号调控系统显然在胃癌的发生中出现了紊乱。因此，探讨细胞增殖和凋亡相关的信号转导通路在胃癌细胞中的状态及其肿瘤生物学意义将有助于胃癌的防治。Fas（CD95／APO-1）是TNF受体超家族的重要成员，它通过与其配体FasL相互作用，激活一系列细胞内激酶，将死亡信号传导至细胞内，从而调控细胞的生存和凋亡。Fas／FasL系统在肿瘤的发生、发展中起着重要的作用。多项研究表明，以磷酸化为基础的MAPK信号通路参与了抑制或激活Fas介导的凋亡。丝裂原活化的蛋白激酶（MAPK）是信号从细胞表面转导至细胞核内部的重要传递者。该通路参与了细胞的生长、发育、分裂及细胞间的功能同步等多种生理过程，并在细胞的恶性转化等病理过程中起重要作用。ERK、JNK与P38蛋白激酶在细胞中执行不同的生理功能。ERK可以通过抑制凋亡而促进细胞生存，而JNK与P38通路则促进细胞凋亡。 然而，在胃癌发生中，对MAPK在Fas介导的凋亡中所起的作用尚缺乏系统的认识。在本研究中，我们将探讨MAPK是否作为一个正／负调控因子参与Fas介导的凋亡，导致胃癌细胞中的生死信号调控系统紊乱，从而在胃癌的发生发展中，发挥重要作用。 实验材料与方法 1．细胞培养：人胃癌细胞系SGC-7901细胞在含10％小牛血清的DMEM培养基，37℃，5％CO₂条件下培养，取对数生长期细胞进行随机分组。 2．利用同位素标记法和特异性识别磷酸化ERK抗体进行Western印迹杂交，检测有或无PD98059预处理后Fas抗体孵育不同时间点胃癌细胞ERK活性。 3．特异性识别磷酸化JNK抗体进行Western印迹杂交，检测Fas抗体孵育不同时间点胃癌细胞JNK活性。4．利用流式细胞术检测胃癌细胞在各处理因素作用下细胞凋亡情况。 5．统计学分析：用SPSS10．0软件统计包进行统计学分析。 实验结果 ＊利用同位素法检测ERK酶活性结果显示：抗Fs抗体孵育后，ERK活性明显升高，30min达高峰。MEKI抑制剂PD98059预处理的SGC－7901细胞ERK活性明显低于对照组。 2．利用特异性识别磷酸化ERK抗体进行Western印迹杂交结果显示：与同位素法测酶活结果相似，抗Fas抗体孵育后，ERK活性升高，于30ndn达高峰。 3．利用特异性识别磷酸化JNK抗体进行Western印迹杂交结果显示：抗Fas抗体孵育后，各样品间州K的活性没有显著差异。 4．流式细胞术检测结果显示：PD98059预处理组，Sub－G；细胞占①0．49。2．59 8)％；单纯抗 FaS抗体处理组，Sub－G；细胞占（3．1467 L 0．155）啪；又照组为（2．9533 Z 0．073）阮。 讨 论 肿瘤的特点是机体细胞凋亡严重下降并无限增殖，机体的免疫系统通常不能有效地杀伤肿瘤细胞，而肿瘤细胞通过逃避免疫监视和削弱免疫反应来获得生存。诸多研究表明，Fs系统在肿瘤细胞的免疫逃逸中发挥重要作用，Fas系统介导的细胞凋亡是 ·2· 细胞免疫反应所致细胞毒作用的重要途径。 肿瘤细胞中存在多种免疫逃逸机制，其中之一就是ERK依赖 性保护性机制。ERK通路是细胞外信号从细胞表面转导到细胞 核内的重要传递者，在许多细胞和组织的生长、分化中发挥了重要 的作用。最近研究发现，在许多肿瘤组织中，均有组成性活性的 znx的表达。sang等研究结果显示，在胃腺癌中，znx的活性明 显高于正常组织，提示导致ERK活化的信号通路在胃癌的发生中 发挥关键的作用。ERK通路参与对Fas介导的凋亡的调控，ERK 通过抑制凋亡而促进细胞生存，使肿瘤细胞对凋亡产生抵抗。 本文结果显示：在无特殊处理情况下，SGC－7901细胞对Fas 抗体的刺激不敏感；与PD98059共同处理细胞后，Fas抗体可引起 SGC－7901细胞凋亡数增多。提示在胃癌细胞中，活化的ERK信 号通路通过抑制Fas介导的细胞凋亡，为肿瘤细胞逃避机体免疫 系统的免疫监视提供可能。PD98059通过抑制ERK的活化，提高 SGC－790细胞对 Fas介导的凋亡信号的敏感性。在 Hela细胞 的研究中，发现ERK也可以导致Hela细胞对Fas和TNF－。杀伤 信号脱敏，而ERK抑制剂能够使细胞对Fas和TNF－。介导的凋 亡敏感。 本研究发现Jas抗体可以导致ERK的活化，其活性在30min 达到高峰并可被PD98059抑制，而对JNK的活性却无显著影响。 这说明，Fas系统不仅可传导凋亡信号，还可以激活细胞的增殖信 号途径，细胞的生存与死亡取决于增殖信号和凋亡信号通路之间 的动态平衡，ERK通路可能发挥对不同信号进行总的协调功能， 最终决定该细胞发生凋亡或产生相反的反应。