SR-BI和S1PR1经MEK1/2-ERK1/2信号通路共同调节人脐静脉内皮细胞的迁移

来源 :南华大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:lai34965
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
【目的】1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)属于鞘磷脂类,在很多细胞中都有表达,而血浆中游离的S1P主要是与高密度脂蛋白(High-density lipoprotein,HDL)相结合,从而介导HDL的诸多功能,S1P主要通过结合它在细胞膜表面的5个膜受体S1PR1、S1PR2、S1PR3、S1PR4、S1PR5来实现这个作用。已知HDL的天然高亲和生理性受体之一就是清道夫受体B类I型(Scavenger receptor class B type I,SR-BI),与S1P不同,SR-B1通过结合载脂蛋白A-I(ApolipoproteinA-I,apoA-I)来介导HDL的一些生物学功能。研究显示,S1P/S1PR1可以介导人脐静脉内皮细胞的迁移,这一机制可以通过MEK1/2-ERK1/2信号通路来实现,同时研究显示HDL可以通过SR-BI介导多种生物学功能,这些功能的分子机制同样涉及MEK1/2-ERK1/2信号通路。但有关HDL/SR-BI介导人脐静脉内皮细胞迁移的分子机制少见报道,那么它们是否能够通过MEK1/2-ERK1/2信号通路来调节人脐静脉内皮细胞的迁移、它们之间是否互相影响以及怎样影响都还不清楚。因此,这些就是本文的研究内容,希望本文的研究结果,有助于为进一步加深了解HDL的内皮保护功能。【方法】1.体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),选择不同浓度S1P进行处理,采用细胞划痕试验和Transwell检测内皮细胞迁移,然后筛选出S1P适宜的浓度。处理人脐静脉内皮细胞不同时间,在不同时间点用细胞划痕试验和Transwell检测内皮细胞的迁移情况,筛选出适宜的处理时间。2.根据上一步骤的实验结果选择合适的S1P浓度和相应的处理时间进行处理,然后加入SEW2871(S1P1特异性激动剂)和W146(S1P1抑制剂),细胞划痕试验和Transwell检测细胞迁移,Western Blot检测磷酸化MEK1/2、磷酸化ERK1/2的水平。3.用PD98059(MEK的特异性抑制剂)处理,Western Blot检测内皮细胞中磷酸化MEK1/2和磷酸化ERK1/2水平变化,细胞划痕试验和Transwell检测人脐静脉内皮细胞迁移。4.用U0126(ERK1/2抑制剂)处理人脐静脉内皮细胞,Western blot检测磷酸化的MEK1/2和磷酸化ERK1/2水平的变化,用细胞划痕试验和Transwell检测人脐静脉内皮细胞迁移。5.通过转染过表达SR-BI或用BLT-1处理(SR-BI抑制剂),再Western Blot检测磷酸化MEK1/2和磷酸化ERK1/2的水平,细胞划痕试验和Transwell检测人脐静脉内皮细胞迁移。【结果】1.S1P在1μmol,24h处对内皮细胞迁移的促进作用最强。2.SEW2871激活S1P1后,p-MEK、p-ERK总量相比增加,细胞迁移增强。用W146处理得到相反的实验结果。3.MEK特异性抑制剂处理后,与对照组相比,p-MEK和p-ERK水平都降低,相应的,S1P对人脐静脉内皮细胞迁移的促进作用减弱。4.ERK抑制剂处理后,得到与抑制MEK处理结果变化趋势类似的实验结果。5.转染过表达SR-BI后,磷酸化的ERK和AKT水平都升高,S1P对人脐静脉内皮细胞迁移的促进作用也相应增强;抑制剂处理SR-BI后,得到与过表达SR-BI相反的试验结果。【结论】SR-BI与S1PR1通过MEK1/2-ERK1/2信号通路共同调节HUVECs的迁移。
其他文献
最低的成本、最高的利润是每一个企业追求的目标。在当今市场竞争日益激烈的情况下,如何科学地统计成本、分析成本,如何有效地降低成本,对每一个企业来说都是迫在眉睫的问题,
我国房地产行业的发展迅速,房地产行业在发展的过程中经历了种种的税收制度改革,与时代发展相适应。“营改增”政策是新修订的政策,已经在金融、房地产等领域得到了实行。在
日常生活是人的最基本的活动形式和寓所,日常生活伦理是为维持日常生活的最基本秩序而确立的规范,具有“底线伦理”的性质。当代中国日常生活伦理的构建是中国社会转型中亟待解
<正>"骨"与"肉"的出现"骨"最早为解剖学名词。在书法艺术中最早提及"骨"的概念,出现在东汉赵壹的《非草书》中,他提出:"人各殊气血,异筋骨,心有疏密,手有巧拙。"[1]在《非草
仲景《伤寒》、《金匮》二书用牡蛎者十二方,其中有二方(牡蛎汤、白术散)系宋林亿等校正《金匮》时,从《外台秘要》等书中补入者。我们可以把它看做是仲景法的发展,因为二方
研究分析了饲料组成对银鲳(Pampus argenteus)幼鱼特定生长率(SGR)及肌肉氨基酸与脂肪酸组成的影响。实验共设4组不同的饲料组成,依次为饲料A(鱼肉糜)、饲料B(鱼肉糜+配合饲料)、饲料C
书籍装帧的艺术设计,是将中国传统文化元素转化成为永久的文化符号的传播过程,在书籍装帧设计中如何应用好民族传统文化符号,也是解决好书籍装帧设计师文化能力的问题。
发展节水灌溉,应因地制宜.当灌区地形坡度较大时,充分利用有利的地形条件发展自压管道输水,具有积极的现实意义.结合引大工程实际,对自压管道输水在自流灌区中的基本参数、布
<正>全面"二孩"政策实行后,相当多企事业单位面临着女职工再次生育的问题,女职工孕期、产期、哺乳期的劳动争议问题不仅让女职工和她的家庭心力交瘁,也让众多企事业单位有苦
空心砌块是一种防止路基边坡表层土体产生侵蚀破坏的坡面防护结构,其稳定性对于坡面防护影响巨大。鉴于目前工程上空心砌块在降雨条件下容易失稳及砌块尺寸设计无理论可依的