鸡△6脂肪酸脱氢酶基因启动子区域多态性及基因时空表达的研究

来源 :河南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhang506079845
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营养与遗传因素间存在密切的互作关系,营养遗传学和营养基因组学是目前研究的热点之一。Δ6脂肪酸脱氢酶是多不饱和脂肪生成的限速酶,而多不饱和脂肪酸在动物体内发挥着重要的生物学功能,与人和动物脂肪酸代谢紊乱症有关,也可能是畜禽肉质及其它经济性状的重要决定因素。但目前该基因结构尚不完全清楚,有关基因功能也尚未得到全面研究。因此,本试验首先利用PCR和5’RACE技术克隆了FADS2基因的5’UTR,并确定准确的转录起始位点。其次,应用混合DNA池测序技术对鸡FADS2基因启动子区域的变异位点进行了筛选,用PCR-RFLP技术分析了新筛选出的变异位点在固始鸡-安卡鸡F2代资源群中的群体遗传特性,并与生长性状、屠体性状等经济性状及血液生化指标等进行了关联分析。另外,应用实时定量PCR对丝毛乌骨鸡FADS2基因的时空表达进行了测定。主要结果如下:1、获得了FADS2基因的完整5’UTR区域其长度为196bp,将鸡FADS2的mRNA序列向5’端延伸了48bp。通过生物信息学分析发现该基因转录起始位点上游28~22bp具有TATA框,其-641bp~+200bp区域内存在一个典型的CpG岛,另有重要的转录因子结合位点。2、在鸡FADS2启动子区域新发现了9个突变位点。应用内切酶AluⅠ、HhaⅠ对其中的2个SNP(C-958T,C-725T)在F2代资源群中的遗传多态性进行了检测。群体遗传学表明:在C-958T位点,C、CC分别是优势等位基因和优势基因型;该位点属于中度多态(0.3308),并处于哈代-温伯格平衡状态。在C-725T位点,C、CC分别是优势等位基因和优势基因型;该位点为低度多态(0.0891),不符合哈代-温伯格平衡。关联分析结果表明,C-958T位点突变与体重、胫围、体斜长、胸宽、胸深、屠体重、肝脏重、肌胃重、脾脏重,血液中的谷草转氨酶、葡萄糖、甘油三酯、乳酸脱氢酶显著相关(P<0.05)。C-725T位点突变与心脏率、肌胃率、腿肌率、血液中的谷丙转氨酶、总胆固醇,肌肉中的C22:3及C22:4显著相关(P<0.05)。3、在对乌鸡公鸡1日龄,4、8、12周龄的肝脏、心脏、肌肉的的FADS2的表达研究发现,FADS2在肝脏中1日龄的表达量显著低于4、8、12周龄的表达量,心脏、肌肉在1日龄,4、8、12周龄的表达量差并不显著;而同一时间段不同组织的FADS2表达量来说,在1日龄各组织的表达量差异并不显著,而4、8、12周龄的肝脏表达量显著高于心脏、肌肉的表达量。心脏与肌肉在各阶段的表达量差异并不显著。由以上试验结果,可得出如下结论1、鸡FADS2基因准确的转录起始位点在ATG上游为196bp处。该基因启动子预测为强启动子。2、鸡FADS2基因启动子区域遗传变异丰富。其中C-958T位点与较多的生长性状、屠体性状及血液生化指标显著关联,而C-725T则与部分屠体性状、血液生化指标及肌肉中多不饱和脂肪酸显著相关。有望作为育种的分子标记辅助选择。3、丝毛乌骨鸡FADS2基因表达呈现明显的时空表达规律。肝脏是是不饱和脂肪酸代谢调控的主要器官,4周龄丝毛乌骨鸡的不饱和脂肪酸代谢已趋于成熟。
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