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第一部分LncRNA NR0的筛选、验证和在胃癌组织、细胞中的表达及其对生物学特性的影响目的:研究lncRNA NR0在胃癌组织和细胞中的表达,在体外对胃癌细胞增殖、克隆、迁移、侵袭的影响,及在体内对裸鼠移植瘤的影响。方法:1培养H.pylori,感染GES1细胞,形成炎症模型,应用Real-time PCR法验证芯片结果。2应用Real-time PCR法检测胃癌组织、癌旁组织以及胃癌细胞系中lncRNA NR0的表达。3应用生物信息学分析lncRNA NR0在TCGA中的表达量、生存曲线及基本特征。4应用RTCA-MP系统、Transwell迁移、Matrigel侵袭和克隆形成实验检测敲低/过表达lncRNA NR0基因对胃癌细胞的增殖活性、迁移、侵袭和克隆形成能力的影响。5构建稳定敲降lncRNA NR0表达的胃癌细胞,检测其增殖活性及克隆形成能力。6应用稳转lncRNA NR0的SGC-7901细胞进行裸鼠皮下种植瘤实验,并观察种植瘤的生长情况。结果:1.Real-time PCR法检测结果显示,与对照组相比,加入H.pylori 72h后,GES1细胞生成炎症因子IL-8、TNF-α和IL-1β表达量升高,证明造模成功,同时lncRNA NR0表达升高（P<0.05）。2.Real-time PCR法分析结果显示,与癌旁组织相比,胃癌组织中lncRNA NR0的表达水平显著上调（P<0.05）;与正常胃粘膜上皮细胞GES1相比,胃癌细胞系中lncRNA NR0的表达水平上调（P<0.05）。3.在TCGA数据库中,lncRNA NR0在癌中表达量显著高于癌旁组织;Kaplian-Meier生存曲线分析发现,lncRNA NR0高表达与低的生存期显著相关;NONCODE数据库预测lncRNA NR0具有复杂的二级结构,RegRNA2.0中显示lncRNA NR0不具有蛋白编码能力。4.敲降lncRNA NR0基因可以抑制胃癌细胞MGC-803和SGC-7901的增殖活性;过表达lncRNA NR0基因可以促进MGC-803和SGC-7901的增殖活性。Transwell实验表明,敲降lncRNA NR0基因可以抑制MGC-803和SGC-7901的迁移和侵袭能力（P<0.05）;而过表达lncRNA NR0基因可以促进MGC-803和SGC-7901的迁移和侵袭能力（P<0.05）。克隆形成实验表明,敲降lncRNA NR0基因可以抑制MGC-803和SGC-7901的克隆形成能力（P<0.05）;而过表达lncRNA NR0基因可以促进MGC-803和SGC-7901的克隆形成能力（P<0.05）。5.稳定敲降lncRNA NR0的胃癌细胞,增殖活性及克隆形成能力均下降（P<0.05）。6.裸鼠荷瘤实验表明,与对照组相比,稳定敲降lncRNA NR0组胃癌细胞裸鼠皮下种植瘤生长速度显著下降（P<0.05）。第二部分LncRNA NR0对胃癌细胞作用机制研究目的:寻找lncRNA NR0的相互作用蛋白,并研究两者的作用机制,从而探讨lncRNA NR0发挥促癌作用的可能机制。方法:1应用流式细胞术检测lncRNA NR0对MGC-803和SGC-7901细胞周期和凋亡的影响,Western blot法检测细胞周期和凋亡相关蛋白。2应用PARIS试剂盒检测lncRNA NR0在MGC-803和SGC-7901细胞核、浆中的分布情况。3应用RNA pulldown实验联合质谱技术寻找与lncRNA NR0相互结合的蛋白。4 RIP实验、竞争结合实验及Western blot实验验证lncRNA NR0能否与NF45和NF90结合,并用delete mapping实验验证具体结合位点。5应用Western blot法在胃癌细胞MGC-803和SGC-7901中检测敲低或过表达lncRNA NR0基因对NF45和NF90表达量的影响。6应用Western blot法和Real-time PCR技术在MGC-803和SGC-7901细胞中检测敲低NF90对lncRNA NR0的影响。7应用IP实验在MGC-803细胞中检测lncRNA NR0是否会影响NF45/NF90复合物的结合。8应用CHIP及Real-time PCR技术在MGC-803细胞中检测敲降lncRNA NR0对NF45/NF90调控基因IL-2表达的影响。结果:1.流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,敲低lncRNA NR0后,MGC-803和SGC-7901细胞凋亡率升高（P<0.05）;细胞周期G2/M期细胞比例升高,细胞周期被阻滞于G2/M期（P<0.05）。2.Real-time PCR法检测结果显示,lnc RNA NR0在胃癌细胞的核、浆中均有分布,且分布比较均衡。3.RNA pulldown联合质谱技术检测出lncRNA NR0能够与NF45/NF90结合。4.RIP和竞争结合实验进一步验证lncRNA NR0在胃癌细胞中能够与NF45/NF90结合。5.Western blot法验证结果表明,在MGC-803和SGC-7901细胞中敲低或过表达lncRNA NR0基因对NF45和NF90的表达量无明显影响。6.与对照组相比,在MGC-803和SGC-7901细胞中敲低NF90会降低lncRNA NR0的表达（P<0.05）。7.IP实验表明,在MGC-803细胞中稳定敲降lncRNA NR0会降低NF45/NF90复合物的结合（P<0.05）。8.CHIP实验表明,在MGC-803细胞中稳定敲降lncRNA NR0会降低NF45/NF90与IL-2启动子序列的结合（P<0.05）。结论:H.pylori感染正常胃粘膜细胞GES1,可诱导lncRNA NR0表达升高,同时验证胃癌组织和细胞系中lncRNA NR0的表达均上调,并且lncRNA NR0可在体内外促进细胞的增殖活性,在体外还可促进细胞的迁移和侵袭能力。lncRNA NR0可以通过与NF45/NF90蛋白相互作用,调节NF45/NF90复合物的稳定性从而影响胃癌的进展。