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目的:芦丁在抗氧化、抗炎症、抗肿瘤等方面都具有重要的的作用,是良好的自由基清除剂,能抑制脂质过氧化过程,对组织细胞免受活性氧族的攻击起到很好的保护作用。但是,关于芦丁对衰老和学习记忆影响的研究很少。本实验对衰老小鼠给予芦丁灌胃后,观测芦丁对衰老小鼠大脑皮质和海马NOS活力、nNOS和SS表达的影响,探索芦丁对衰老小鼠学习记忆功能影响的形态学变化。
方法:选用昆明小鼠60只(30±5g),随机分为对照组、衰老组、阳性对照组和低、高剂量芦丁给药组,每组12只。对衰老组、阳性对照组和低、高剂量芦丁给药组小鼠皮下注射D-半乳糖(D-gal)(120mg·kg-1·-1),连续6w,建成亚急性衰老模型。对照组小鼠皮下注射等量生理盐水,连续6w。对阳性对照组小鼠给予脑复康(30mg·kg-1)灌胃,低、高剂量芦丁给药组给予芦丁(20mg·kg-1,40mg·kg-1)灌胃,连续6w。灌胃与皮下注射同步进行。各组动物普饲普水喂养6w后,用Y-迷宫实验测试各组小鼠学习记忆行为变化;用NADPH-d组织化学和ABC免疫组织化学方法分别测定小鼠大脑皮层和海马结构的NOS活力和nNOS、SS阳性神经元蛋白表达水平。
结果:
1.Y-迷宫实验结果:与衰老组小鼠学会次数(134.75±52.39)相比,其它各组小鼠迷宫实验的学会次数明显减少(p<0.05);与阳性对照组小鼠学会次数(87.86±54.56)比较,高剂量芦丁给药组小鼠迷宫实验的次数(49.22±27.05)明显减少(P<0.05),而其余实验组小鼠迷宫学会次数无明显改变。
2.NADPH-d组化反应结果:
大脑皮层:与衰老组相比,其余各组的NOS活性升高(p<0.01);与对照组相比,低剂量芦丁给药组的NOS活性明显降低(P<0.05)。CA1区:各组间的NOS活性均有显著性差异(P<0.05)。CA3区:阳性对照组、低剂量和高剂量芦丁给药组比对照组、衰老组的NOS活性高(P<0.05)。齿状回:各组间NOS活性均有显著性差异(P<0.05)。
3.ABC免疫组化反应结果:
3.1nNOS阳性神经元
大脑皮层:与衰老组nNOS阳性神经元数目(44.00±3.39)相比,各实验组的nNOS阳性神经元数目均明显增多(p<0.05);低剂量和高剂量芦丁给药组的nNOS阳性神经元数目(69.80±7.40,73.25±3.77)比对照组、阳性对照组的nNOS阳性神经元数目(58.40±6.27,53.00±10.65)明显增多(p<0.05)。CA1区:各组间NADPH-d阳性神经元数目均有显著性差异(p<0.05)。CA3区:与衰老组nNOS阳性神经元数目(8.40±0.55)相比,其余各组nNOS阳性神经元数目明显增多(P<0.05);低剂量和高剂量芦丁给药组nNOS阳性神经元数目(49.60±2.17、60.75±1.63)比对照组和阳性对照组的nNOS阳性神经元数目(10.20±1.10、11.40±0.89)明显增多(p<0.05)。齿状回:低剂量和高剂量芦丁给药组nNOS阳性神经元数目(25.60±2.88、30.00±9.63)比对照组、衰老组和阳性对照组的nNOS阳性神经元数目(16.40±2.61、13.80±1.92、13.00±2.30)明显增多(p<0.05)。
3.2SS阳性神经元
大脑皮层:各实验组之间的生长抑素(somatostatin,SS)阳性神经元的数目无明显变化(P>0.05)。CA1区:与衰老组SS阳性神经元数目(24.20±0.84)相比,其余各组SS阳性神经元数目明显增多(P<0.05);高剂量芦丁给药组SS阳性神经元数目(56.00±7.87)比其它各组SS阳性神经元数目都明显增多(P<0.05);低剂量芦丁给药组SS阳性神经元数目(31.60±0.89)比阳性对照组SS阳性神经元数目(39.00±1.58)明显减少(P<0.05)。CA3区:低剂量和高剂量芦丁给药组SS阳性神经元数目(15.20±1.64、15.6±1.34)比对照组、衰老组、阳性对照组SS阳性神经元数目(12.60±1.52、12.80±0.84、13.80±2.59)明显增多(P<0.05)。齿状回:与衰老组的SS阳性神经元数目(15.30±5.36)相比,阳性对照组和高剂量芦丁给药组的SS阳性神经元数目(23.00±4.74、27.80±8.20)明显增多(P<0.05);高剂量芦丁给药组SS阳性神经元数目比对照组SS阳性神经元数目(17.60±2.20)明显增多(P<0.05)。
结论:芦丁对亚急性衰老小鼠学习记忆功能有明显改善的作用。其作用机制可能与芦丁对不同脑区NOS活性及nNOS、SS阳性神经元蛋白表达的调节有关。