【摘 要】
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本文对33份薄壳山核桃种质资源进行ISSR-PCR分子标记,建立不同品种之间的亲缘关系树状图,并对薄壳山核桃干腐病和叶斑病进行研究,明确其致病菌,为薄壳山核桃种质资源遗传多样性分析以及病害防治提供理论依据。试验结果如下:1、分别建立了薄壳山核桃分子标记的最佳PCR反应体系:94℃预变性4 min,94℃变性30秒;退火温度50℃-53℃之间45秒;72℃延伸35秒,循环35次,72℃再次修复延伸1
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本文对33份薄壳山核桃种质资源进行ISSR-PCR分子标记,建立不同品种之间的亲缘关系树状图,并对薄壳山核桃干腐病和叶斑病进行研究,明确其致病菌,为薄壳山核桃种质资源遗传多样性分析以及病害防治提供理论依据。试验结果如下:1、分别建立了薄壳山核桃分子标记的最佳PCR反应体系:94℃预变性4 min,94℃变性30秒;退火温度50℃-53℃之间45秒;72℃延伸35秒,循环35次,72℃再次修复延伸10 min,扩增结束后4℃冰箱保存。2、PCR反应产物经电泳检测,共得到清晰扩增位点58个,其中多态性位点45个,多态性位点百分率(PPB)为77.59%,Nei’s基因多样性(H)为0.3010,Shannon信息指数(I)为0.4182,说明薄壳山核桃具有丰富的遗传多样性。根据NTSYS软件计算33份薄壳山核桃各品种间UPGMA遗传距离在0.67-0.84之间,并绘制聚类分析树状图,在遗传相似系数0.68处划分A、B、C、D、E五个类群,在这5个类群中,D类包含品种最多有14种,E类最少只包含海核桃一个品种,说明海核桃与其他品种遗传距离最远。3、分离纯化薄壳山核桃病变的枝条和病叶,得到两种菌株,采用柯赫氏法则测定这两种病原菌均为致病菌株。结合形态学与rDNA-ITS分子生物学分析确定薄壳山核桃干腐病病原菌为葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea,叶斑病病原菌为链格孢菌。
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