现有研究表明,体内脂质过氧化是导致机体衰老,以及肿瘤、心脑血管等诸多疾病的重要原因之一,植物多糖的抗氧化活性常与抗肿瘤活性有一定关联,并与许多疾病的防治相关,因此,天然多糖抗氧化剂的筛选日益引起人们的更多关注。本课题以天然多糖为研究对象,分别进行了多糖和多糖制剂的分析方法研究,以及松塔多糖和党参复方多糖的提取分离与抗氧化活性研究、党参复方多糖颗粒剂的制备和抗氧化活性研究等系列工作,主要内容如下:1、对多糖含量测定方法--3,5-二硝基水杨酸比色法(DNS比色法)做出了重要改进,收到多重良好效果,具有很好的实用性。DNS法属于多糖含量测定常用方法之一,具有许多突出优点,在计算多糖含量时,该法需要以水解后的多糖样品显色液测定值减去水解前的样品显色液测定值,这种计算差值的方法在计算多糖含量的同时,还兼有去除杂质干扰的优点,其主要不足是增加了差值计算和相应测定步骤。在本实验所建立的新方法中以水解前的样品显色液,取代原用的比色测定用空白液,因而不必再进行样品液水解前、后测定值的差值计算,同时也省略了相应的多步操作。与原方法相比,多糖含量测定结果基本一致,方法学考察各项指标均符合规定。改进后的DNS法既能简化计算与操作,又能避免空白溶液选用不当所导致的显色剂吸收干扰,具有多重良好效果。该方法可用于红松松塔多糖的含量测定,对其它多糖的含量测定也可提供参考。2、建立了党参复方多糖颗粒剂中多糖含量测定的新方法--淀粉酶法联合DNS改进法进行测定,有效克服了辅料淀粉干扰有效成分多糖含量测定这一技术难点,文献中尚未见有同类工作报道。在应用上述DNS改进法对党参复方多糖颗粒剂的有效成分多糖进行含量测定时曾遇到困难,因所用辅料淀粉也为多糖成分,导致DNS改进法测定结果实际反应的是总多糖含量,即有效成分多糖和辅料淀粉含量之和,文献中未见相应解决办法。本实验中尝试了下述思路:首先采用淀粉酶法除去颗粒剂中的辅料淀粉,将淀粉酶解为小分子双糖后,再利用双糖和多糖的醇溶性差异,以醇沉法分离出有效成分多糖,此后即可使用DNS改进法对该多糖进行含量测定,避免淀粉的干扰;实验结果表明,所建立的淀粉酶法和DNS改进法联合测定党参复方多糖颗粒剂多糖含量的方法,成功克服了辅料淀粉对有效成分多糖含量测定的干扰,方法学考察各项指标均符合规定,该方法可用于党参复方多糖颗粒剂多糖含量测定,对于含有辅料淀粉的其它中药制剂的多糖含量测定也可提供参考。3、制备不同分子量的红松松塔多糖,并进行体外抗氧化活性研究,对多糖纯化程度与其活性的相关性进行初步探索。实验中采用膜分离工艺制备不同分子量的红松松塔多糖,并对各组分进行脱蛋白纯化处理。测定各多糖产物的还原能力、清除DPPH ·自由基能力。实验结果表明,不同分子量的松塔粗多糖均具有体外抗氧化活性,呈现还原能力和清除DPPH ·自由基活性,多糖浓度与其活性呈正相关,各粗多糖样品脱蛋白后抗氧化活性均有降低。该实验结果提示,当制备活性多糖时,不应盲目进行脱蛋白处理,有必要佐以相应的活性实验提供参考。4、在以上单一植物多糖活性研究的基础上,又进行了中药复方多糖的活性研究,对不同方法制备的党参复方总多糖的抗氧化活性进行测定,并对纯化程度与其活性的相关性进行探索。采用膜分离工艺制备党参复方总多糖,并对得到的总多糖进行脱蛋白、脱色等不同方法的纯化,测定各多糖产物的还原能力、清除羟基自由基、DPPH·自由基及超氧阴离子自由基的能力。相关结果表明党参复方总多糖呈现明显的体外抗氧化活性,多糖活性随其浓度增大而增强,总多糖经脱蛋白、脱色等纯化步骤后体外抗氧化活性减弱。该实验结果提示,党参复方总多糖具有较好的体外抗氧化活性,同时还进一步验证了上述实验结论,在活性多糖制备工艺设计中不应盲目纯化,不应轻易确定是否脱蛋白、脱色,有必要伴随相应的活性实验。5、将上述党参复方总多糖分离为不同分子量的多糖,分别进行体外抗氧化活性测定。实验中采用超滤技术制备不同分子量的党参复方多糖,测定各多糖产物的还原能力、清除羟基自由基、DPPH·自由基及超氧阴离子自由基能力。实验结果表明,不同分子量的党参复方多糖样品均呈现体外抗氧化活性,并且具有良好的量效关系,党参复方多糖的抗氧化活性随其分子量的增大而增强。6、对党参复方多糖颗粒剂的制剂工艺、质量检查以及颗粒剂的抗氧化活性进行研究。在制剂工艺研究中,通过比较试验,优选出颗粒剂的辅料种类及原料和辅料的配比,以稀乙醇为润湿剂进行制粒,干燥,整粒,即得党参复方多糖颗粒剂。体外抗氧化研究结果表明,党参复方多糖颗粒剂具有较好的抗氧化活性,具有还原能力、清除羟基自由基、DPPH·自由基及超氧阴离子自由基能力,样品的多糖浓度与其活性呈正相关。由此可知,党参复方多糖在制成颗粒剂后仍具有较好的体外抗氧化活性,该实验结果可为党参复方多糖制剂的后续研发提供参考依据。本课题中建立了两种新的分析方法,进行了松塔多糖和党参复方多糖的制备与分离,研究了红松松塔多糖的抗氧化活性,以及党参复方多糖及其制剂的抗氧化活性,以上系列研究取得了有意义的进展,文献中尚未见有相同工作报道。由上述实验结果可知,来自废弃资源的红松松塔多糖值得关注,有必要进一步深入研究。目前在天然多糖研究领域中,活性研究较多,纯化程度对活性影响的规律探讨尚少,单味中药多糖的研究较多,复方中药多糖的研究偏少;本实验中对多糖纯化程度与其活性的相关性,以及复方中药多糖等当前研究领域的薄弱环节,进行了以上探索性研究,期望能为同类研究工作提供一定参考。