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舌癌是常见的口腔癌,占我国口腔癌发病率的39.95%,居第一位。舌癌大多数为鳞癌,具有生长快,浸润性较强,恶性程度较高等特性,舌癌的淋巴结转移率较高,晚期可发生肺部或其他部位的远处转移。目前舌癌的治疗是以手术治疗为主,辅以放疗和化疗。但术后复发及转移率较高。因此,寻求有效且不良反应小的药物治疗舌癌,对于改善患者的生活质量和提高生存率具有积极意义。野黄芩苷是从植物黄芩的茎、叶中提取的黄酮类化合物,具有抑菌、利尿、抗炎、抗变态及解痉等作用,还具有较强抗癌反应的生理效能[1]。本研究采用野黄芩苷作用于体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,观察Tca8113细胞的凋亡情况及细胞survivin和caspase-8蛋白表达的改变,探讨野黄芩苷诱导人舌鳞癌细胞凋亡的作用机制,为中药野黄芩苷抗癌作用的研究提供理论依据和实验数据。目的:通过观察野黄芩苷作用后人舌鳞癌细胞的凋亡情况及细胞survivin和caspase-8蛋白表达的改变,探讨野黄芩苷对人舌鳞癌细胞凋亡诱导作用及可能机制。方法:1取购于南京凯基生物科技有限公司的人舌鳞癌Tca8113细胞株进行体外培养用于实验。2实验分组:分为对照组、不同浓度野黄芩苷药物组。对照组用含10%FBS(胎牛血清)的RPMI1640培养液培养舌鳞癌细胞Tca8113;野黄芩苷组根据预实验结果,把野黄芩苷浓度分为80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml三组,分别处理舌鳞癌Tca8113细胞。3采用原位末端转移酶标记技术(Tunel)观察不同浓度野黄芩苷作用人舌鳞癌Tca8113细胞48h后细胞早期凋亡情况。4采用免疫细胞化学法观察不同浓度野黄芩苷作用人舌鳞癌Tca8113细胞48h后survivin和caspase-8蛋白的表达情况。5采用蛋白印迹(Western-blot)技术检测不同浓度野黄芩苷作用人舌鳞癌Tca8113细胞48h后survivin和caspase-8蛋白的表达情况。6数据统计分析:应用SPSS17.0统计学软件,对结果进行单因素方差分析,P<0.05表示差异有统计学意义。结果:1采用Tunel检测:80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml野黄芩苷作用于Tca8113细胞48h后,采用Tunel检测,结果显示:对照组中可见零星散落的细胞核呈深棕色或棕黄色的凋亡细胞,其细胞凋亡率为4.45±0.27%。野黄芩苷组随着药物浓度的增高,棕黄色胞核的细胞逐渐增多。其凋亡率分别为17.63±0.25%、36.23±0.36%、51.84±0.58%。经过统计学分析,各组之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。(Fig.1~5和Table.1)。2采用免疫细胞化学染色检测:80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml的野黄芩苷作用于Tca8113细胞48h后,采用免疫细胞化学染色。阳性表达是细胞胞浆呈棕黄色。survivin免疫细胞化学染色结果:对照组细胞浆着色很深,呈现清晰的棕黄色。野黄芩苷组随着药物浓度的增高,胞浆棕黄色逐渐减弱。caspase-8免疫细胞化学染色结果:对照组细胞胞浆着色呈现浅黄色,野黄芩苷组随着药物浓度的增高,细胞胞浆棕黄色逐渐增强。经过统计学分析,各组之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。(Fig.6~13和Table.2~3)。3采用Western-Blot检测:80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml的野黄芩苷作用于Tca8113细胞48h后,采用Western-Blot检测。结果显示,survivin蛋白的表达:以对照组的表达量最高,随着药物浓度的增高,survivin蛋白的表达依次递减。caspase-8蛋白的表达:以对照组的表达量最低,随着药物浓度的增高,caspase-8蛋白的表达依次递增。此结果与免疫细胞化学的结果一致。经过统计学分析,各组之间的差异均有统计学意义(P <0.05)。(Fig.14a~b、Fig.15a~b和Table.4~5)。结论:野黄芩苷对舌鳞癌Tca8113细胞有抑制生长和促进凋亡的作用,机制可能与野黄芩苷使舌鳞癌细胞survivin蛋白表达的下调和caspase-8蛋白表达的上调有关。