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目的:通过筛选和验证食管癌患者外周血miRNA标记物,预测其靶基因,并检测相应的mRNA及蛋白质在食管癌患者中的表达水平的改变,探讨其异常表达与食管癌可能的关系。方法:以食管癌患者外周血为资源,以健康群体为对照,依托miRNA芯片技术平台,通过对外周血白细胞miRNA谱分析及候选指标的筛选,并以实时荧光定量PCR方法对单一候选miRNA进行大样本验证,确定食管癌患者外周血白细胞中差异表达的miRNA标记物,利用TargetScan、miRDB、PicTar等靶基因预测软件在线预测miRNA可能的靶基因,同时利用Pubmed数据库对其靶基因功能进行检索,筛选出与肿瘤、免疫、细胞周期、细胞增殖、细胞分化相关的靶基因,并应用RT-qPCR、蛋白质印迹法(Western Blot)检测其表达水平的变化。结果:芯片结果显示,与正常对照组比较,食管癌组上调表达miRNA为184种,下调表达miRNA为143种。根据miRNA表达差异倍数、P值等数据,选出其中12种候选miRNA,在32例食管癌、27例健康志愿者标本中,应用RT-qPCR对候选miRNA表达水平进行验证。结果显示,与正常对照组比较发现,在食管癌组中,miR-181b-5p、miR-4695-3p的表达水平均降低(p<0.01、p<0.05);而miR-4725-5p表达水平升高(p<0.001)。对以上三种差异表达的miRNA进行在线靶点预测及用实时荧光定量PCR技术验证对应的17种靶基因,结果发现,与正常组(1.4±0.31)相比,YWHAH基因在食管癌组(4.73±1.17)的mRNA表达水平上调,具有统计学差异(P<0.01);COL1A1基因的mRNA表达水平,正常组(1.82±0.39),食管癌组(7.76±1.86),该基因在食管癌患者外周血白细胞中mRNA表达上调(P<0.05);与正常组(2.20±0.50)相比,HINT1基因在食管癌组(0.93±0.17)的mRNA表达水平下调,具有统计学差异(P<0.05)。Western Blot实验结果显示YWHAH、COL1A1食管癌组中显著升高,差异具有统计学意义(P(27)0.05,P(27)0.01);而与正常对照组相比,HINT1在食管癌组中的表达水平没有明显变化,差异无统计学意义。结论:1.根据RT-qPCR结果,我们认为miR-181b-5p、miR-4695-3p、miR-4725-5p可能是食管癌患者诊断的潜在分子标记物。2.从miR-181b-5p、miR-4695-3p两种miRNA表达水平与YWHAH、COL1A1两种靶基因在mRNA和蛋白水平的表达量看,miR-181b-5p、miR-4695-3p对其上述靶基因的表达可能起一定的调控作用,但需要深入研究加以证明。