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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是造成断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原,常与其他病原混合感染导致严重的临床疾病,给养猪业造成巨大经济损失。猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)是近年发现的1种新的PCV,能够引起猪皮炎与肾病综合征(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome,PDNS)及母猪繁殖障碍,该病的出现给养猪业造成新的威胁,因此有必要开展PCV2和PCV3分子流行病学及病毒遗传变异的研究。本研究首先对我国9个省份不同地区PCV2和PCV3的流行状况进行调查,共测定了66个PCV2分离株和4个PCV3分离株的完整基因组序列。根据系统发育分析,PCV2 3种主要基因型(PCV2a、PCV2b和PCV2d)仍普遍存在于猪场中,其中PCV2d为主要基因亚型。基于PCV3-ORF2氨基酸序列分析,PCV3-CN-JL53/PCV3-CN-LN56属于PCV3a亚型,PCV3-CN-HLJ3属于PCV3b亚型,PCV3-CN-0710属于PCV3-IM。本研究为我国PCV2和PCV3分子流行学及遗传多样性研究提供了科学证据。PCV2基因组小,编码蛋白有限,病毒的体外复制依赖于宿主细胞相关蛋白的辅助,我们先前对PCV2-Cap相互作用的宿主蛋白鉴定时,筛选到转录因子ELF4与PCV2基因组存在相互作用,ELF4在天然免疫系统中具有刺激I型干扰素分泌的作用。为了阐明ELF4与PCV2复制之间的互作关系。本研究构建的真核表达质粒pCAGGS-HA-ELF4瞬时转染PK-15细胞,通过间接免疫荧光染色结果表明该蛋白主要定位于细胞核中。利用IFN-β启动子荧光素酶报告质粒检测了ELF4诱导IFN-β产生的影响,结果表明ELF4能够显著激活IFN-β-luc,且呈剂量依赖性;过表达转录因子ELF4能够显著增强PCV2的复制滴度,在病毒感染后72 h测定病毒滴度,与对照组相比,过表达ELF4能够提高病毒增殖效率6.5倍,表明过表达ELF4能够促进病毒复制;通过设计针对ELF4的干扰RNA,敲低ELF4的内源性表达,结果表明抑制ELF4的表达明显降低PCV2的复制效率。上述结果证明转录因子ELF4能够介导I型干扰素的产生进而增强PCV2在体外的增殖效率。PK-15细胞是PCV2在体外增殖的主要靶细胞,有关PCV2是如何吸附和内吞于PK-15细胞的研究报道较少。为了阐明PCV2入侵PK-15细胞所依赖的内吞途径,我们通过激光共聚焦观察不同时间点PCV2入侵PK-15的内吞动力学试验,结果表明,PCV2于4℃条件下仅发生吸附作用而不会发生内吞作用,随着时间延长PK-15细胞内吞的PCV2病毒颗粒内吞逐渐增多,于第60min时即可观察到病毒颗粒聚集于细胞核周围。采用不同内吞途径的药物抑制剂以及过表达内吞相关蛋白探究PCV2吸附、内吞和感染的具体过程,通过荧光定量PCR、病毒滴度测定和共定位分析,结果表明PCV2入侵PK-15细胞不依赖内体的酸性环境,不依赖网格蛋白、发动蛋白和小凹蛋白介导的内吞途径,细胞脂筏中的胆固醇去除能够促进病毒入侵。