论文部分内容阅读
目的:研究来源于杜仲和补骨脂的三种植物雌激素成分汉黄芩素、补骨脂二氢黄酮和补骨脂查尔酮,对A375细胞生物学特性的影响,从分子生物学水平探讨中药植物雌激素对A375细胞黑素合成及ER信号通路的调控机制,为中药植物雌激素治疗黄褐斑等皮肤色素沉着性疾病提供理论依据。方法:将汉黄芩素、补骨脂二氢黄酮及补骨脂查尔酮作用于A375细胞,采用MTT法、NaOH裂解法以及多巴氧化法检测A375细胞增殖、黑素分泌以及TYR活性;采用western blot法检测A375细胞TYR及JNK蛋白的表达;采用RT-PCR法检测A375细胞TYR、TRP-1、TRP-2以及MAPK细胞信号转导通路中关键蛋白激酶mRNA的表达。并检测雌激素受体阻断剂ICI182780以及ERK通路阻断剂U0126对三种植物雌激素作用的影响。结果:汉黄岑素(10μmol·L-1、1μmol·L-1、10-1μmol·L-1、10-2μmol·L-1、10-3μmol·L-1)、补骨脂二氢黄酮(10μmol·L-I、1μmol·L-1、10-1μmol·L-1、10-2μmol·L-1、10-3μmol·L-1)、补骨脂查尔酮(1μmol·L-1、10-1μmol·L-1、10-2μmol·L-1、10-3μmol·L-1)对A375细胞的增殖无显著影响,但对A375细胞黑素合成量以及TYR活性有不同程度的抑制作用(P<0.01 或 P<0.05);与给药组比,ICI182780(1μmol·L-1)和 U0126(10μmol·L-1)分别部分阻断了汉黄芩素(10μmol·L-1)、补骨脂二氢黄酮(1Oμmol·L-1)和补骨脂查尔酮(1μmol·L-1)的作用,能逆转药物下调A375细胞黑素合成、TYR活性的作用(P<0.01或P<0.05);10μmol·L-1汉黄芩素、补骨脂二氢黄酮及1μmol·L-1补骨脂查尔酮均不同程度抑制了 A375细胞中TYR和JNK蛋白的表达,而这种作用能够被ICI182780所抑制(P<0.01);10μmol·L-1汉黄芩素、补骨脂二氢黄酮及1μmol·L-1补骨脂查尔酮均不同程度抑制了 A375 细胞中 TYR、TRP-1、TRP-2、ERK1、ERK2 和 JNK2mRNA的表达(P<0.01或P<0.05),而ICI182780和U0126能显著逆转以上三种植物雌激素对 TYR、TRP-1、TRP-2、ERK1、ERK2 和 JNK2 mRNA 的抑制作用(P<0.01 或 P<0.05)。结论:汉黄芩素、补骨脂二氢黄酮、补骨脂查尔酮这三种植物雌激素成分能够降低A375细胞TYR活性及蛋白表达量,并下调TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA的表达,从而抑制A375细胞黑素的合成。这种作用与ER及其下游的JNK、ERK等激酶信号通路密切相关。