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目的:通过谷氨酰胺酶抑制剂DON干预谷氨酰胺分解途径,研究其对C57BL/6小鼠T细胞增殖的影响及对EAE疾病进程的防治效果,阐明DON对小鼠Th17与iTreg细胞分化的调节作用,进而为Th17介导的相关性疾病(如MS)防治药物的设计、开发提供一条新颖的途径。方法:1、分离出C57BL/6小鼠的脾脏,用0.2、0.5、1.0 μMCFSE对细胞进行染色,优化CFSE染色条件。利用分选试剂盒从脾细胞中分选出T细胞与CD4+T细胞,研究DON对T细胞增殖的影响。2、制备初始CD4+T细胞与抗原提呈细胞悬液,在培养基中加入促进Th17细胞分化的相关细胞因子和抗体(如anti-mCD3/CD28、IL-6、TGF-β、anti-mIL-4、anti-mIFN-γ和 anti-mIL-2);或在anti-mCD3/CD28预包被的细胞培养板中加入初始CD4+T细胞悬液,再加入促进iTreg细胞分化的相关细胞因子(包括TGF-β和IL-2),体外刺激初始细胞朝着Th17或iTreg细胞分化,优化并确立细胞的最佳分化条件。3、在确立的最佳分化条件的基础上,将不同浓度的DON作用于细胞,流式细胞术分析单个细胞内表达IL-17和Foxp3的频数,确定DON最佳作用浓度。4、通过细胞代谢分析研究谷氨酰胺分解途径对Th17和iTreg细胞分化的影响,qRT-PCR检测谷氨酰胺分解代谢途径中相关基因表达水平的变化。5、按0.24 mL/只(前肢肩胛部和后肢髋骨部每处60 μL)注射MOG-MT-IFA抗原混合液,0.2 mL/只腹腔注射PTX工作液,并于48h后腹腔注射0.2 mL/只PTX工作液,构建EAE模型。用该模型初步研究DON对EAE的防治效果及探索可能的机制。结果:在最优分化条件下Th17细胞分化率可达到34.6%,iTreg细胞分化率可达30.5%。DON抑制T细胞增殖、影响Th17与iTreg细胞分化,并能显著阻止EAE的病理进程。结论:染色条件的优化,及Th17与iTreg细胞最优分化条件的确立,能为其介导的相关疾病病理机制的探讨、相关临床药物的研发和临床实验的进展提供良好的保障。DON通过调控谷氨酰胺分解途径,抑制T细胞增值,并可能通过调控Th17/iTreg细胞分化平衡而降低EAE的临床评分,为T细胞尤其是Th17细胞介导的相关性疾病的治疗提供了 一条新思路。