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研究目的1.以先天性心脏病（congenital heart disease，CHD）的患儿与健康对照儿童为研究对象。建立高分辨率熔解曲线法（high resolution melting，HRM）检测胱硫醚β-合酶（Cystathionine beta synthase，CBS）基因多态性的最佳反应体系和条件，并对其与先天性心脏病的关系进行初步探讨。2.利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction andrestriction fragment length polymorphism analysis，PCR-RFLP）法检测两组人群5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶（Methylenetetrabydrofolate reductase，MTHFR）基因的若干单核苷酸多态性位点（Single nucleotide polymorphism，SNP），探讨其多态性与单纯性先天性心脏病的发生是否存在关联，为先天性心脏病的病因研究提供进一步的理论基础。研究方法1.选择流行病学病例对照研究方法，选取患有先天性心脏病（非综合征型）的患儿150例作为病例组；以150例性别年龄均具有可比性的正常儿童作为对照组。2.提取研究人群静脉血基因组DNA，对CBS基因，建立HRM检测突变的条件并进行SNP分型。3.对由HRM方法检测的CBS基因型进行测序验证。4.对CBS基因SNP基因型及等位基因进行统计分析，初步探讨其与先心病的关联。5.通过聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）检测MTHFR基因的三个SNP位点：MTHFR C677T（rs1801133）、A1298C（rs1801131）、G1793A（rs2274976）的多态性。6.应用Hardy-weinberg遗传平衡检验、x2检验、t检验、相对危险度分析等方法计算MTHFR在病例组和对照组各基因型及等位基因频率的差异，并对三个位点的不同基因型组合进行分析。探讨三个位点的单独效应及联合作用对于CHD发生的意义及其大小。结果1.对照组人群的各位点基因型符合Hardy-weinberg遗传平衡。2. HRM检测CBS基因目的片段的最佳退火温度为62℃，qPCR-HRM最佳反应体系为20μl，引物浓度为0.2μmol/L，Mg2+为2.5μmol/L，模板DNA为60ng。在优化的体系条件下筛选出的突变型样本经测序验证与实验结果一致。3.利用HRM检测出CBS基因SNP位点（rs75616587），但其突变基因型和等位基因在病例和对照组中分布无统计学差异。4.677位CC、CT、TT基因型频率病例组为20.67%、52.00%、27.33%；对照组为39.33%、44.00%、16.67%。与野生型纯合子CC比较，杂合子CT个体患先心病的风险较高（OR＝2.249，95%CI:1.305-3.877，Ρ=0.003），突变纯合子TT个体患先心病的风险是野生型的3.121倍（95%CI:1.612-6.043，P=0.001）。携带突变等位基因T个体的患病风险是野生型C的1.813倍（95%CI:1.310-2.508，P=0.000）。1298位基因型AA、AC频率病例组为76.00%、24.00%，对照组为87.33%、12.67%，未发现基因型CC。携带杂合子AC个体的患病风险是野生纯合子AA的的2.177倍（95%CI:1.183-4.077，P=0.011）。携带突变等位基因C个体的患病风险是野生型A的2.017倍（95%CI:1.128-3.604，P=0.016）。1793位GG、GA基因型频率病例组为91.33%、8.67%；对照组为86.00%、14.00%，未发现基因型AA。两组突变杂合子GA与野生纯合子GG频率分布差异无统计学意义（P=0.145），等位基因G、A分布差异无统计学意义（Ρ=0.158）。组合基因型分析显示677与1298位点，1298与1793位点组合较单独作用时对先心病的致病力增加，可能对先心病存在联合作用。结论1.利用高分辨率熔解曲线检测CBS基因片段SNP位点特异性良好，是CBS基因筛选突变的有效方法。2.未发现CBS基因SNP位点rs75616587多态性与先天性心脏病存在统计学关联。3. MTHFR C677T、MTHFR A1298C突变是先心病的危险因素。4. MTHFR C677T与MTHFR A1298C，MTHFR A1298C与MTHFR G1793A对先心病存在联合作用