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该研究从以下三个方面探索利用bcr-abl融合基因片段制备CML基因疫苗的研究.一、慢性髓性白血病bcr-abl融合基因片段的克隆与原核表达的研究 以慢性髓性白血病细胞株K562细胞总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增包含bcr-abl融合位点周围的基因片段,定向克隆到pGEX-6P-1载体谷光甘肽-S转移酶(GST)的下游.将重组质粒转化大肠杆菌BL21菌株,以1.0mmol/l IPTG诱导bcr-abl融合基因片段的表达,其产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,结果证实该融合蛋白分子量约42KD.用该表达产物免疫ICR小鼠,所制备的抗血清可与K562细胞中特异性抗原结合,表明该bcr-abl/GST融合蛋白具有bcr-abl基因产物的特异抗原性.二、慢性髓性白血病bcr-abl融合基因片段真核细胞表达的研究 根据bcr-abl(b3a2)融合基因序列设计-对引物,以CML K562细胞总RNA为模板,通过RT-PCR扩增包含bcr-abl融合位点周围的450bp的基因片段,并将其克隆进pGEM-T easy载体.经序列测定证实其阅读框架正确后,将bcr-abl融合基因片段正向插入真核表达载体pcDNA3.1.以脂质体介导重组质粒pcDNAbcr-abl转染CHO细胞,间接免疫荧光检测结果显示,pcDNAbcr-abl转染CHO细胞的免疫荧光强度高于K562阳性对照细胞.用该重组质粒DNA免疫BALB/c小鼠可产生特异性抗体.三、稳定表达bcr-abl融合基因片段的人-鼠嵌合肿瘤细胞系的建立从重组克隆载体pGEMbcr-abl中酶切出bcr-abl融合基因片段,并将其亚克隆进反转录病毒载体pLXSN中.脂质体介导重组反转录病毒载体pLXSNbcr-abl转染包装细胞PT67,G418筛选后获得稳定产病毒的包装细胞.收集病毒上清感染SP2/0细胞(H-2),经G418筛选获得稳定表达bcr-abl融合基因片段的SP2/0细胞株.PCR证实bcr-abl融合基因片段已稳定整合于SP2/0细胞基因组中,RT-PCR证实感染后的SP2/0细胞能稳定表达bcr-abl融合基因片段,从基因组整合和基因表达水平证实我们获得了能稳定表达bcr-abl融合基因片段的人-鼠嵌合肿瘤细胞系,作为研究bcr-abl融合基因疫苗的实验工具.