目的:探讨放射性碘标记siRNA的方法,以期建立体内肿瘤显像、基因靶向和放射性靶向协同治疗体系。方法:设计人血管内皮生长因子小干扰RNA,通过RT-PCR和Western blotting验证其有效性。利用Bolton-Hunter试剂间接将人VEGF siRNA标记上放射性碘原子并通过3%琼脂糖凝胶电泳、电泳图谱自显影和高效液相色谱法验证。标记后的siRNA在37℃下与50%胎牛血清分别孵育24、48、72h后,通过20%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其血清稳定性。以甲醇和5%醋酸铵(1:1)混合液、丙酮和生理盐水(1:1)混合液为展开剂,131I标记后的siRNA分别点样于薄层层析硅胶板和新华一号滤纸,展开后放入薄层扫描仪扫描,测标记后siRNA放化纯。Lipofectamin2000介导碘标记hVEGF siRNA转染HepG2细胞,通过Real time PCR检测标记后siRNA生物活性。结果:设计并合成有效的人VEGF siRNA序列,并成功的利用Bolton-Hunter试剂标记上放射性碘原子。标记碘原子后的siRNA,具有良好血清稳定性和较高的放化纯(>80%)。不论是131I-siRNA还是127I-siRNA,其降解目的mRNA的活性不发生改变,标记过程不影响siRNA生物活性。同时,Lipofectamin2000在一定程度上还会降低VEGF mRNA表达。结论:放射性碘原子成功的标记人VEGF siRNA,为之后研究siRNA靶向转运、基因和放射性协同治疗奠定基础。