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背景:消化道肿瘤作为全球最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和病死率在世界上均位居前列。细小病毒H-1非结构蛋白1(Non-structural protein 1,NS1)可抑制一些肿瘤的增殖。CD44是肿瘤干细胞的表面标志物之一,包括CD44标准体(Standard form CD44,CD44s)和CD44变异体(CD44 transcript,CD44v),与肿瘤的形成、进展有关。活性氧(Reactive oxygen species,ROS)升高是临床放、化疗治疗肿瘤的重要机制之一。目的:探讨NS1是否通过调控CD44-xCT-ROS信号通路影响CD44表达进而调节消化道肿瘤细胞内ROS水平达到抑瘤作用及其分子机制。方法:1.构建带蛋白标签的重组质粒pFlag-NS1;2.利用X-tremeGENE HP脂质体转染技术使NS1在消化道肿瘤细胞MKN28、SGC7901、MKN45和HT29中表达;3.Western blot技术检测NS1在消化道肿瘤细胞中表达情况;4.通过CCK-8细胞增殖实验观察NS1对消化道肿瘤细胞增殖能力的影响;5.细胞划痕实验检测NS1对消化道肿瘤细胞迁移能力的影响;6.流式细胞术分析NS1对消化道肿瘤细胞株CD44表达的影响及ROS水平;7.qRT-PCR技术检测NS1对结肠癌HT29细胞株CD44s及CD44v表达的影响。结果:1.CCK-8细胞增殖实验结果显示,与空质粒组和空白组相比,CD44~-高分化胃癌细胞MKN28重组质粒pFlag-NS1组细胞增殖能力无明显差异(P>0.05);CD44~+中分化胃癌细胞SC7901、CD44~+低分化胃癌细胞MKN45以及CD44~+的HT29结肠癌细胞重组质粒pFlag-NS1组的增殖能力均降低(P<0.05)。2.划痕实验结果显示,与空质粒组和空白组相比,MKN28细胞pFlag-NS1组细胞迁移能力无明显差异(P>0.05);SC7901、MKN45和HT29细胞pFlag-NS1组的迁移能力均出现不同程度的减弱(P<0.05)。3.流式细胞术检测CD44表达量结果显示,与空质粒组相比,MKN28细胞pFlag-NS1组CD44表达量无明显差异(P>0.05),且CD44为阴性,无表达;SGC7901、MKN45和HT29细胞pFlag-NS1组的CD44表达量均出现不同程度的降低(P<0.05)。4.流式细胞术检测ROS水平结果显示,与空质粒组相比,MKN28细胞pFlag-NS1组ROS水平无明显差异(P>0.05),且ROS水平均较低;SGC7901、MKN45和HT29细胞pFlag-NS1组的ROS水平均显著升高(P<0.05),且ROS在6-24h升高显著,24h后开始出现不同程度的降低。5.qRT-PCR检测HT29细胞CD44s及CD44v表达的结果显示,与空质粒组相比,pFlag-NS1组的CD44s升高(P<0.05),CD44v均出现不同程度的降低,其中以CD44v3-CD44v6、CD44v9-CD44v10降低显著(P<0.05),CD44v6降低最明显。结论:1.NS1能够抑制CD44~+消化道肿瘤细胞的增殖和迁移,对中、低分化的胃癌细胞抑制作用较好。2.NS1通过下调CD44使消化道肿瘤细胞内ROS升高,即通过调控CD44-xCT-ROS信号通路达到抑瘤效应。3.NS1主要通过上调CD44s、下调CD44v发挥对结肠癌细胞的抑瘤作用,以CD44v6下降最显著。