【摘 要】
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1995年,KAI1/CD82作为肿瘤转移抑制基因首次从前列腺癌细胞系中分离出来,属于跨膜4(TM4SF)超家族,其编码为29.6KD的跨膜糖蛋白,具有调节细胞运动,分化,抑制肿瘤转移的作用。大
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1995年,KAI1/CD82作为肿瘤转移抑制基因首次从前列腺癌细胞系中分离出来,属于跨膜4(TM4SF)超家族,其编码为29.6KD的跨膜糖蛋白,具有调节细胞运动,分化,抑制肿瘤转移的作用。大量研究表明,胰腺癌中KAI1 mRNA减少与其转移灶形成和病人不良预后直接相关。我们进一步应用KAI1质粒转染人胰腺癌细胞系,发现转染后胰腺癌细胞生长受抑制,迁移能力减弱;动物体内实验也发现经KAI1质粒注射治疗的荷瘤鼠与对照组相比肝和肺转移灶数目减少,体积缩小。鉴于KAI1质粒转染的局限性以及腺病毒载体的高效转染率,我们构建了表达KAI1复制缺陷型腺病毒载体,为深入研究其抗胰腺癌转移的信号通路机制及胰腺癌的基因治疗奠定基础。本实验应用Ad-EasyTM系统与KAI1基因在大肠杆菌中同源重组的方法,构建Ad-KAI1腺病毒载体,酶切鉴定正确后以脂质体转染的方式在293细胞中包装,PCR、Western blot鉴定后扩增、病毒纯化柱纯化,测定病毒滴度后选择最适感染强度感染人胰腺癌细胞PANCI,检测到感染Ad-KAI1后高转移的PANCI细胞中KAI1的多量表达,即获得了携带人肿瘤转移抑制基因KAI1复制缺陷型腺病毒载体。目前,KAI1抗胰腺癌转移的信号通路机制尚未明确,相关研究表明KAI1可减弱EGF受体信号通路,调节EGF受体二
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