目的:本课题旨在研究藤黄酸对二甲基亚硝胺（dimethylnitrosamine,DMN）诱导的大鼠肝纤维化模型的治疗作用及可能的分子机制;藤黄酸对大鼠HSC-T6及人HSC-LX2增殖和凋亡的作用,并初步探讨了其分子机制。方法:1.体内实验:采用腹腔注射DMN的方法,建立化学损伤性动物肝纤维化模型。给予大鼠口服藤黄酸（5、10 mg/kg）,直至造模结束。检测了大鼠血清中谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）的水平;取大鼠肝组织进行病理切片,通过HE染色观察大鼠肝脏的病理变化,通过Sirius Red和Masson染色观察大鼠肝脏胶原纤维的变化,并且测定与胶原合成有关的羟脯氨酸的含量;采用Real-time PCR、免疫组织化学、Western blot方法检测了肝纤维化相关因子α-SMA、TGF-β及与胶原合成和降解相关的COL-I、TIMP-1、MMP-2的表达;在分子机制的研究中,采用Western blot方法考察了藤黄酸对PI3K/Akt、MAPK信号通路相关蛋白的影响。2.体外实验:采用MTT法检测不同浓度藤黄酸（0.5、1、1.5、2 μM）处理大鼠肝星状细胞T6和人肝星状细胞LX2后的细胞活力,同时也检测了相同浓度下藤黄酸对L02（人正常肝组织细胞）活力的影响;流式细胞仪检测藤黄酸处理后细胞周期的变化,并通过Annexin-V/PI双荧光染色标记法检测T6和LX2的凋亡率;Western blot分析了 α-SMA、TGF-β的表达水平;采用Western blot方法检测了Cyclin-D1、Cdk-4 细胞周期蛋白和凋亡相关蛋白 Bcl-2、Bax,caspase-3,caspase-9和PARP表达,在分子机制研究中,考察了 PI3K/Akt、MAPK通路中相关信号分子变化;以2 μM藤黄酸、20μM U0126和25μM LY294002同时干预HSC-T6和LX2两种细胞,比较藤黄酸与这两种抑制剂对上述信号途径的作用。结果:1.体内研究发现,藤黄酸缓解了 DMN引起的大鼠肝脏损伤,显著降低了ALT,AST水平,肝纤维化大鼠肝脏中的羟脯氨酸水平减少,降低α-SMA、TGF-β的mRNA及蛋白表达。通过下调COL-Ⅰ、TIMP-1、MMP-2的表达来减少ECM的生成并促进其降解。分子机制研究表明,藤黄酸下调p-Erk/Erk、p-JNK/JNK、p-p38/p38的表达来阻断MAPK通路;下调p110α、p-Akt/Akt表达来调节PI3K/Akt信号通路。2.体外结果显示,藤黄酸能显著抑制肝星状细胞的活力,但同剂量下对正常肝细胞几乎无毒性;降低了 α-SMA、TGF-β的表达来抑制HSC-T6和LX2的活化;通过调控细胞周期停滞于S期,下调Cyclin-D1和Cdk-4表达来抑制HSC-T6和LX2增殖;AV/PI双染实验表明藤黄酸能够诱导T6和LX2凋亡,抑制Bcl-2/Bax表达,上调cleaved caspase-3/-9/PARP蛋白的表达以诱导线粒体凋亡信号通路。藤黄酸在肝星状细胞中能够抑制p-Erk/Erk、p-JNK/JNK、p-p38/p38的表达来调节MAPK通路;下调p110α、p-Akt/Akt表达来抑制PI3K/Akt信号通路。U0126和LY294002均分别明显抑制了 Erk和Akt信号分子的磷酸化,而藤黄酸能同时抑制这两条信号通路的磷酸化。藤黄酸发挥与Erk和Akt阻断剂相似的作用。结论:本研究发现在体内藤黄酸对DMN诱导的肝纤维化大鼠具有较好的治疗作用。在体外方面,藤黄酸能够抑制肝星状细胞的增殖并诱导其凋亡,这是通过抑制PI3K/Akt和MAPK信号途径来实现。本实验发现藤黄酸具有潜在的应用价值,为抗肝纤维化创新药物开发奠定基础。