移植神经双端侧吻合后神经再生的实验研究

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yly63543435
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目的:周围神经不完全损伤在临床上十分常见,目前并没有有效的治疗办法。为了解决这个问题,设计了动物不完全损伤模型后,取移植神经和不完全损伤神经远近端做双端侧吻合,研究不完全损伤神经远端神经纤维的再生及临床应用价值。材料与方法:⑴实验材料:选用成年雄性新西兰兔,体重2±0.2公斤,共20只。⑵手术处理:动物随机分为A B两组(n=10)。用1%戊巴比妥钠作腹腔注射,3ml /kg 。待麻醉成功,A组仰卧位固定于手术台,无菌条件下做右上肢前内侧纵切口长约1.5厘米,寻找并分离正中神经,高位锐性切取正中神经1厘米。结扎止血,生理盐水冲洗后依次缝合伤口。无菌敷料包扎。然后动物俯卧位固定于手术台,重新消毒铺单,无菌条件下做右后肢后外侧纵切口长约2.5厘米,切开皮肤后钝性分离臀大肌,臀中肌,暴露坐骨神经,在坐骨神经干分叉处上2厘米锐性切断最内侧的一个束支,然后在切口两侧各0.5厘米处坐骨神经干外膜上开直径约1毫米的小窗,将正中神经两端用10/0显微外科缝线行双端侧吻合于坐骨神经开窗处,吻合角度为45度。每个吻合口以3定点吻合法吻合3针,使神经紧密对合,生理盐水冲洗后分层缝合切口。B组动物俯卧位固定于手术台,无菌条件下作右后肢后外侧纵切口长约2.5厘米,切开皮肤后钝性分离臀大肌,臀中肌。暴露坐<WP=4>骨神经,在坐骨神经干分叉处上2厘米锐性切断最内侧的一个束支,不予缝合修复。结扎止血,生理盐水冲洗后分层缝合伤口,无菌敷料包扎。全部动物常规分笼饲养3个月。⑶取材与检测:术后3个月,动物用1%戊巴比妥做腹腔麻醉,3毫升每公斤,待麻醉成功后,俯卧位固定于手术台,无菌条件下做右后肢上段后外侧纵切口长约2.5厘米,切开皮肤后钝性分离臀大肌臀中肌,暴露右侧坐骨神经,做两侧后肢下段纵切口长约1厘米,切开皮肤后暴露腓肠肌,刺激电极刺入吻合口近端坐骨神经,记录电极置于腓肠肌,刺激电压为5.0mV。记录神经两侧运动诱发电位潜伏期及波幅。动物做肌电图后,耳缘静脉注入5ml空气处死,立即取A组神经远端吻合口0.5厘米以远坐骨神经段,长约1厘米。B组神经干切口1厘米以远坐骨神经段,长约1厘米。取材后立即放入以10%磷酸缓冲的福尔马林溶液温度4度固定24小时后,经酒精分级脱水,二甲苯透明石蜡包埋后,从标本近端开始连续切片,切片片厚5微米,HE染色后,在光镜下观察切片中神经轴突和髓鞘的组织学变化。动物处死后立即取实验组远端吻合口以远0.5厘米,对照组神经干陈旧切口以远1厘米各一段(约1、1、1立方毫米),立即置入4%戊二醛中低温(4度)固定48小时,PBS漂洗,1%固定2小时,再次漂洗数次,30%,50%,70%,90%,100%丙酮梯度脱水各5分钟,EPON812包埋,修块,切厚块定位,超薄切片,醋酸铀和柠檬酸钠双染色,洗净吸干,JEM--2000型透视电镜下观察神经超微结构的变化。<WP=5>结果:1大体情况:术后早期所有大鼠足不能跖屈,实验组有7只动物,对照组有8只动物出现足部溃疡,趾甲暗淡甚至脱落等皮肤营养障碍,所有动物腓肠肌出现缓慢的萎缩,不同程度的行走困难和跛行,对疼痛刺激不敏感;一个月后,实验组溃疡均愈合,对照组5只溃疡愈合。3个月后,实验组动物趾甲色泽正常,大部分足趾跖屈恢复,但关节活动略显僵硬,两侧后肢姿态对称,腓肠肌饱满,行走时稍有跛行,对疼痛反射敏感。对照组动物有两只溃疡仍未愈合,面积变大,考虑为长期失神经支配后皮肤营养障碍所致。余动物营养障碍大部分消失,腓肠肌萎缩明显,行走时均有跛行,对疼痛的刺激没有实验组敏感。2肌电图:术后3个月取材检测,实验侧及对照侧刺激坐骨神经时,均可以在腓肠肌记录到动作电位,两侧相比,神经潜伏期和波幅均有显著性差异。(P〈0.05〉)。3组织学检查:手术显微镜下发现神经端侧吻合部稍增粗,有完整连续的神经外膜包绕,远近端吻合口处的坐骨神经主干和正中神经愈合为一体,未见神经瘤及瘢痕生成;缝线周围可见少量纤维粘连,余各处神经外膜良好,神经光滑,弹性良好。光镜下可见切片可见有大量的无髓纤维再生,并有新生有髓神经纤维再生,髓鞘较薄,轴突细,不均匀。电镜下可见轴索及髓鞘均较成熟,髓鞘明显增厚,呈同心圆状,板层排列致密整齐,雪旺氏细胞增生明显,轴浆清晰,内富含微丝和微管,部分轴索内可见线粒体。结论:移植神经双端侧吻合术后神经有一定的再生能力,能加强不完全损伤神经残存的功能,使靶器官失去的某些功能得到恢复。故有一定的临床应用价值。但研究刚<WP=6>刚开始,许多机理尚不明了,很多问题有待进一步研究。临床应用宜慎重,只能作为一种无法用常规方法修复的损伤神经的补救性治疗疗法,绝不可用其代替常规术式。
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