目的:1.比较新疆假龙胆不同极性部位獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的含量。2.观察新疆假龙胆不同极性部位急性毒性,为临床安全用药提供依据。3.通过体内及体外药效学实验对各极性部位的肝保护作用及其机制进行研究,筛选出保肝活性较强的极性部位,并探讨各极性部位中环烯醚萜苷类成分的含量与药效之间的联系。方法:1.新疆假龙胆全草乙醇提取物（GE）,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到不同极性部位。2.采用高效液相色谱法（HPLC）法,以甲醇-0.04%磷酸水溶液为流动相（流速1.0 mL/min）同时测定新疆假龙胆不同极性部位獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的含量。3.采用最大给药量法,24 h内灌胃给予最大浓度、最大体积的GE、水（GW）、正丁醇（GBA）、乙酸乙酯提取物（GEA）混悬液,在14天内观察小鼠的毒性反应情况。4.采用四氯化碳（CCl₄）致小鼠急性肝损伤,测定血清中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）的活性以及总蛋白（TP）、总胆红素（TB）的含量;测定肝匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽转移酶（GSH）及过氧化氢酶（CAT）的水平;Elisa试剂盒测定小鼠血清中肿瘤坏死因子–α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-6（IL-6）的水平;HE染色观察肝脏病理学改变。5.L02细胞体外肝损伤模型的建立:采用不同浓度CCl₄和H₂O₂作用于L02肝细胞,24 h后,MTT法检测细胞活性,确定CCl₄和H₂O₂造模的最佳浓度;细胞实验分为七组:空白对照组、CCl₄/H₂O₂模型组（终浓度分别为20 mmol/L、100μmol/L）、水飞蓟素（5μg/mL）+CCl₄/H₂O₂组、GBA（5、10和20μg/mL）+CCl₄/H₂O₂ 3个处理组,每组设8个复孔;通过MTT法检测细胞活性;通过试剂盒测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的泄漏量、ALT、AST的活性;测定细胞内MDA含量;Annexin V/PE双染法检测细胞凋亡率;RT-PCR法测定内质网应激（ERS）相关基因（CHOP、PERK、IRE1和ATF6 mRNA）的转录水平;Western-blot法检测CHOP、Caspase12和NF-κB蛋白表达的情况。结果:1.GE、GPE、GEA、GBA和GW的出膏率分别为24.4%、8.20%、4.92%、11.47%和19.67%。獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷在4.04¹29.54 mg/L（r=0.9994）、3.96¹26.73 mg/L（r=0.9993）、0.93²9.70 mg/L（r=0.9995）浓度范围内线性关系良好。3种化合物含量在GBA中最高,在GEA和GW中较少,在石油醚部位（GPE）中基本检测不到。2.GE、GW、GBA、GEA经口给药的最大给药量分别为86.88g生药/Kg、203.35 g生药/Kg、348.73 g生药/Kg、325.20 g生药/Kg。3.血清生化指标分析结果显示新疆假龙胆不同极性部位中、高剂量给药组也能不同程度的降低CCl₄所致急性肝损伤小鼠血清ALT、AST、ALP活性及TB含量的升高（P<0.05或P<0.01）,并可显著升高TP的含量（P<0.05或P<0.01）;而新疆假龙胆不同极性部位中、高剂量给药组均能逆转由CCl₄引起的肝脏中MDA水平升高（P<0.01）和GSH、SOD、CAT水平的降低（P<0.01）;新疆假龙胆不同极性部位也可在不同程度上降低CCl₄所致急性肝损伤小鼠血清中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平;肝脏病理切片结果也证实新疆假龙胆不同极性部位给药组能够在一定程度上改善肝细胞损伤。根据血清肝功能指标、肝匀浆中氧化损伤相关指标、炎症因子及肝脏病理切片结果综合分析,新疆假龙胆不同极性部位均能在一定程度上改善CCl₄所致小鼠急性肝损伤,其中以GBA保肝活性最强。4.随着CCl₄和H₂O₂浓度的升高,L02肝细胞存活率逐渐下降,采用20 mmol/L、100μmol/L CCl₄和H₂O₂作用24 h作为L02肝细胞的损伤模型;GBA预处理能够显著提高CCl₄和H₂O₂损伤L02肝细胞的存活率:与正常对照组相比,GBA对CCl₄和H₂O₂损伤L02肝细胞培养上清液中ALT、AST具有显著的降低作用（P<0.05）,GBA显著降低CCl₄和H₂O₂损伤L02肝细胞导致的MDA含量的升高（P<0.05）,降低LDH的泄露（P<0.05）;CCl₄和H₂O₂损伤后模型组细胞早期凋亡率明显升高（P<0.05）,各GBA组与模型组相比,均能显著抑制细胞凋亡（P<0.05）,且呈剂量依赖性;同时CCl₄和H₂O₂干预后能显著上调ERS相关基因CHOP、PERK、IRE1和ATF6 mRNA的表达水平（P<0.05）,而GBA预处理后能够显著下调ERS相关基因CHOP、PERK、IRE1和ATF6 mRNA表达水平（P<0.05）,GBA同时能够降低CHOP和Caspase12在总蛋白中的表达水平（P<0.05）,降低NF-κB p65在细胞核蛋白中的表达并使NF-κB p65在胞质蛋白中的表达量增加（P<0.05）。结论:新疆假龙胆经回流提取后GE出膏率为24.4%,再经初步萃取后,各极性部位出膏率GW﹥GBA﹥GPE﹥GEA。含量测定方法专属性强、准确度高、重现性好,可用于比较新疆假龙胆不同极性部位中3种活性成分的含量。根据中药急性毒性分级标准,在本研究条件下,新疆假龙胆各极性部位均无毒、安全。通过体内和体外药效学实验均证实新疆假龙胆能够抑制脂质过氧化,提高抗氧化活性,抑制炎症反应达到保护肝脏的作用,该植物的保肝活性与环烯醚萜苷类成分的含量存在一定的相关性,环烯醚萜苷可能是新疆假龙胆发挥保肝作用的主要物质基础。本研究从细胞分子水平上进一步探讨了新疆假龙胆保肝作用的机制,发现新疆假龙胆能够通过下调ERS相关基因的转录水平和蛋白的表达情况达到抑制细胞凋亡的目的,同时其作用机制还与NF-κB p65的核转位有关,新疆假龙胆能够抑制NF-κB信号通路的激活减轻炎症反应,保护肝细胞。本研究为后续合理开发应用新疆假龙胆提供了一定的理论依据。