盾叶薯蓣环阿屯醇合成酶基因的克隆与表达

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盾叶薯蓣为我国特有的药用植物,主要分布在湖北西部和陕西南部,其富含的薯蓣皂甙元是合成甾体激素类药物的主要原料,年需求量很大。盾叶薯蓣野生资源已远远不能满足薯蓣皂甙元生产的需求,而人工栽培的盾叶薯蓣存在着薯蓣皂甙元含量低的缺陷,因此,有必要加强盾叶薯蓣的科学研究,特别是致力于提高薯蓣皂甙元含量的遗传改良研究。 植物中氧化鲨烯在环阿屯醇合成酶催化下形成环阿屯醇,是植物中薯蓣皂甙元生物合成的关键步骤之一。本研究根据已报道的部分植物环阿屯醇合成酶基因序列中的保守部分设计、并合成了简并引物,以盾叶薯蓣总RNA为模板,经RT-PCR扩增得环阿屯醇合成酶基因的核心片段,大小为433bp;进一步通过SMART-RACE技术分别克隆得到了环阿屯醇合成酶基因的5′cDNA末端cDNA和3′cDNA末端cDNA;根据5′末端和3′末端的序列设计引物、以盾叶薯蓣总RNA为模板,通过PCR技术得到了盾叶薯蓣环阿屯醇合成酶基因全长cDNA。序列比对及结果分析表明,盾叶薯蓣编码环阿屯醇合成酶基因全长cDNA为2208bp、编码756个氨基酸残基,与已报道的单子叶植物的环阿屯醇合成酶基因在氨基酸序列上的同源性比较高。把盾叶薯蓣环阿屯醇合成酶基因的全长cDNA构建在毕赤酵母表达载体,并转入毕赤酵母中表达以进行基因功能验证。通过HPLC对其催化产物进行检测,证明了所克隆的基因是盾叶薯蓣中编码环阿屯醇合成酶的基因。 本研究从盾叶薯蓣中克隆了环阿屯醇合成酶基因。对于今后通过转基因技术提高盾叶薯蓣中薯蓣皂甙元含量的研究,提供了一定的理论参考。
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