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实验室前期以宁夏枸杞“宁杞1号”及其雄性不育突变体“宁杞5号”为材料,在分析其花药差异蛋白质组学的基础上,分离克隆了一个差异表达基因,经生物信息学分析得知,该基因属于R2R3-MYB类转录因子家族基因,命名为LbMYB103。在此基础上,本实验探究了枸杞LbMYB103基因的表达特征及其在植物生长发育过程中的调控作用,为明确该基因在枸杞生长及花药发育过程中可能的调控机制奠定一定基础。实验结果如下.:(1)以“宁杞1号”枸杞五个发育时期的花药为材料,利用荧光定量PCR技术分析LbMYB103基因随花药发育过程的表达特征。结果表明,LbMYB103基因在花药造孢细胞时期开始表达,小孢子母细胞时期表达量增加,四分体时期达到峰值,后期逐渐降低。(2)构建LbMYB103基因的原核表达载体LbMYB103-pET32a-BL21,利用IPTG进行体外诱导,经SDS-PAGE凝胶电泳分析得知,该基因能够在体外进行表达。(3)利用RT-PCR技术分离得到LbMYB103基因的完整开放阅读框(ORF),构建植物过表达载体LbMYB103-pCAMBIA2301-LBA4404,并通过根瘤农杆菌介导法转化模式植物烟草。观察植株生长发育性状,发现转基因烟草植株生长迟缓,开花数目明显少于野生型且花器官出现畸变现象。结果表明,枸杞外源基因LbMYB103影响了烟草植株的生长发育,可能在花型和花药的发育过程中起着调控作用。此结果为探讨LbMYB103基因在枸杞植株生长发育过程中的调控功能奠定了理论基础。(4)设置12组含不同外源激素及不同浓度配比的MS培养基处理枸杞叶片外植体。结果表明,含1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA的培养基诱导出的叶片愈伤组织长势最好,其分化出的不定芽状态也最好,至此稳定的枸杞遗传转化体系建立成功,为后期获得转基因枸杞植株奠定了基础。进一步利用根瘤农杆菌介导法侵染枸杞叶片外植体获得转LbMYB103基因枸杞植株,以野生型“宁杞1号”枸杞为对照发现,转基因枸杞植株更容易受到外界环境胁迫,导致整个植株生长迟缓,叶片发紫,畸形。研究结果为阐明LbMYB103基因在植物花器官发育过程中潜在的调控机制提供了研究基础,同时也为拓展LbMYB103转录因子在植物生长发育中的功能提供了新思路。