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1研究目的原发性肝细胞肝癌是目前较为普遍的恶性肿瘤之一,其危害巨大,但发病机制仍不是十分明确,目前的治疗手段对肝癌的治疗效果仍不理想。长链非编码RNA是一类转录本超过200nt的非编码RNA,其最初被认定为无功能的转录产物,但近来的研究表明其在细胞活动,疾病与肿瘤的发生发展方面都具有重要作用。为了探索针对肝癌更有效的诊断和治疗途径,就与肝癌发生发展相关的lnc RNA进行研究具有明确的意义。2研究方法2.1通过分析GEO数据库的数据集GSE58043,发现长链非编码RNA LOC100288637在肝癌组织中高表达。2.2在肝癌组织和配对癌旁组织以及肝癌细胞系和正常肝细胞系中运用逆转录-聚合酶链式反应检测LOC100288637的表达量。2.3使用脂质体向肝癌细胞转染LOC100288637的小干扰RNA,逆转录-聚合酶链式反应检测干扰效率,敲低LOC100288637后,用CCK-8实验检测肝癌细胞的增殖情况变化。2.4分析GEO数据库的另一个数据集GSE10694,得出微RNA hsa-miR-101-3p在肝癌组织中低表达。2.5运用RNA-hybrid分析hsa-miR-101-3p与LOC100288637的结合可能性。2.6使用脂质体向肝癌细胞转染hsa-miR-101-3p的模拟物,之后运用逆转录-聚合酶链式反应检测LOC100288637的表达量变化。2.7使用荧光标记探针在肝癌细胞中对LOC100288637进行荧光原位杂交实验,鉴定其在肝癌细胞内的分布情况。2.8组间比较采用单因素方差分析,符合正态分布的计量资料以`X±s表示,两两比较采用LSD—t检验。3实验结果3.1逆转录-聚合酶链式反应结果显示:LOC100288637在手术切除肝癌患者的肝癌组织和癌旁组织样本中的相对表达量分别为1.80±1.35、0.53±0.34,两组比较,差异有统计学意义(t=22.94,p<0.05),表明LOC100288637在肝癌组织内高表达。肝癌细胞系(Huh7、Hep G2、PLC/PRF/5、Bel-7704、SMMC-7721)中,LOC100288637的相对表达量分别为1.34±0.17、0.88±0.05、0.85±0.07、0.58±0.04、1.00±0.17,正常肝细胞系(L02)中LOC100288637的相对表达量为0.10±0.01,用五个肝癌细胞系分别与L02细胞系进行比较,差异有统计学意义(t=12.56,24.47,18.41,18.38,9.08,p<0.05)。表明LOC100288637在肝癌细胞系中高表达。3.2逆转录-聚合酶链式反应结果显示:在转染si RNA后的Hep G2细胞中,LOC100288637-control组和LOC100288637-si RNA组的LOC100288637表达量分别为38.97±3.98,5.12±0.15,差异有统计学意义(t=14.72,p<0.01)。表明si RNA对LOC100288637的干扰效果明显。3.3 CCK-8检测结果显示:向Hep G2细胞转染LOC100288637 si RNA 12小时和24小时后,LOC100288637-si RNA组的Hep G2细胞增值活性明显降低,而LOC100288637-control组仍保持较高的增殖活性,两组比较,差异有统计学意义(F=139.80,F=191.40,p<0.01),表明LOC100288637能协助肝癌细胞的增殖。3.4逆转录-聚合酶链式反应结果显示:向Hep G2细胞转染hsa-miR-101-3p模拟物后,hsa-miR-101-3p control组和hsa-miR-101-3p mimics组LOC100288637表达量分别为1.00±0.05,0.08±0.00,两组相比较,差异具有统计学意义(t=29.48,p<0.05),表明hsa-miR-101-3p能抑制LOC100288637的表达。3.5荧光原位杂交实验显示:LOC100288637荧光探针主要存在与细胞质中,细胞核内较为暗淡,表明LOC100288637在Hep G2细胞核质均有表达,但主要存在于细胞质。4结论长链非编码RNA LOC100288637接受hsa-miR-101-3p的靶向调控而影响肝癌细胞的增殖,其很可能在肝癌的发生发展过程中发挥重要作用,作为针对肝癌潜在的生物学靶点,其深入的功能和机制有待进一步研究。