论文部分内容阅读
水稻矮缩病毒(rice dwarf virus，RDV)基因组包含12条双链(double-stranded，ds)RNA，分别编码了7个结构蛋白(structural proteins)，如：P1，P2，P3，P5，P7，P8，P9；5个非结构蛋白(nonstructural proteins)，如：Pns4，Pns6，Pns10，Pns11，Pns12。本试验通过建立水稻悬浮细胞系，应用聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)介导将水稻矮缩病毒接种到水稻悬浮细胞内，在接种的不同时间取样，通过酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白免疫杂交法(Western blot)的方法，检测RDV在水稻悬浮细胞中的复制周期，以及P8，P9蛋白的表达动态。结果表明：RDV外壳蛋白在水稻悬浮细胞体内迅速复制，16h左右达到复制的最高峰，在50h左右到达最低，但在68h左右又所增殖；P8蛋白在4h就能被检测到，16h到24h蛋白的表达量是最大的，而RDV P9蛋白在8h才能检测到目的条带，其表达量最大值出现的时间点与P8蛋白是一样的(24h左右)。利用地高辛(DIG)标记法，制备S8和S9的DNA探针，通过Northern-blot点杂交的方法，研究RDV的S8和S9在水稻悬浮细胞中的转录周期。结果显示：RDV-S8和S9转录都在接种后4h就可以检测到增加，但是S8在第12h出现转录的最大值，而且保持了这最大值一直保持到20h：S9的转录峰值出现在接种后的20h。同时，利用实时荧光定量PCR(Real time-PCR)检测了S8-mRNA的转录，结果显示S8-mRNA在24h出现最大积累量，进一步证实Northern-blot的结果。通过对接种后水稻悬浮细胞的防御酶(POD，PAL，PPO)的测定，并利用高效液相色谱技术研究了细胞生长素(indole acetic acid，IAA)和赤霉素(gibberellin，GA)的变化情况，结果表明：接种RDV的水稻悬浮细胞，其防御酶系活性随着病毒的侵入，都有不同层次的提高，并且三种酶出现最大活性与病毒复制高峰在时间点上是一致的，都在接种后第16h左右；悬浮细胞内IAA的变化是随病毒病毒的侵入，细胞内源的IAA积累量呈减少趋势；而GA则反