功能化金纳米粒子对生物流体中半胱氨酸和高半胱氨酸识别研究

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半胱氨酸和高半胱氨酸是两种重要巯基氨基酸,二者结构上只相差一个亚甲基,性质十分相似,其含量变化与人体健康有着密切联系。多年来对二者的检测一直是研究热点。目前常用的检测半胱氨酸和高半胱氨酸的方法有荧光、紫外、化学发光等方法,但这些方法普遍存在选择性差问题,从而限制了其在实际临床检测中的应用。金纳米粒子因具有独特的性质,已被广泛应用于众多领域。采用非离子型含氟表面活性剂功能化金纳米粒子以提高金纳米的稳定性、分析选择性及生物相容性等。由于金纳米粒子与巯基能形成强的金-硫键,已被广泛用于巯基氨基酸的检测。然而,不经过分离就可特异性同时检测半胱氨酸和高半胱氨酸的方法未见报道。本文主要利用非离子型含氟表面活性剂功能化金纳米粒子对半胱氨酸和高半胱氨酸进行特异性检测,研制高效、快速、选择性高的金纳米光度探针,并对实际样品进行分析。以下为研究的内容:(1)研究发现,半胱氨酸/高半胱氨酸诱导功能化金纳米粒子聚集速率与金纳米溶胶的pH有密切关系。金溶胶pH为6.5时,半胱氨酸和高半胱氨酸诱导金纳米聚集速率几乎相等,由此测定二者总量;而当金溶胶pH为12.0时,半胱氨酸诱导金纳米聚集速率远大于高半胱氨酸诱导速率,可单独测定半胱氨酸含量。据此建立了一种基于金纳米粒子光学特性不需要分离即可同时检测半胱氨酸和高半胱氨酸的光度法。该方法应用于人尿样和血浆中半胱氨酸和高半胱氨酸测定,所得回收率在95.4%-105.5%之间。(2)依据半胱氨酸和高半胱氨酸诱导非离子型含氟表面活性剂功能化金纳米粒子聚集,导致金纳米共振光散射信号增强的现象,并结合金溶胶pH对金纳米聚集速率的影响,开发了一种特异性检测半胱氨酸和高半胱氨酸的共振光散射法,最低检出限为0.04μM。该方法步骤简便,灵敏度高。(3)建立了一种新颖的高效液相色谱柱-共振光散射体系,并成功测定了人尿样中的半胱氨酸和高半胱氨酸。该方法的创新点在于将非离子型含氟表面活性剂功能化金纳米粒子作为高效液相色谱柱后共振光散射检测试剂。
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