论文部分内容阅读
恶性黑色素瘤(Malignant Melanoma,MM)是临床上较为常见的皮肤粘膜和色素膜恶性肿瘤,也是发病率增长最快、致死率最高的恶性肿瘤之一,严重威胁人类健康。黑色素瘤原发病灶多发生于皮肤,其初诊患者多为Ⅰ、Ⅱ期,一旦出现淋巴转移或远处转移,患者五年生存率将急剧下降。相关研究表明,在黑色素瘤患者中,淋巴结转移和远处转移的病人总生存时间下降,是预后不良的独立危险因素。因此,预防原发病灶转移是提高黑色素瘤治疗效果的重要方法之一。光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)是一种新兴的治疗方法,它涉及光敏剂靶向聚集于肿瘤细胞,并通过适当的波长的光局部激发。光敏剂,如5-氨基酮戊酸的激发会导致细胞毒性产生ROS,包括单线态氧、羟基自由基和超氧化物阴离子、通过氧化应激的作用诱导细胞分子生物的破坏,导致细胞凋亡或坏死。与传统治疗方法相比,以5-氨基酮戊酸(5-aminolevulinic acid,5-ALA)为光敏剂的光动力治疗具有选择性高、并发症少等优点,所以广泛应用于肺腺癌、非黑色素瘤和乳腺癌等多种肿瘤的治疗,但是ALA-PDT治疗黑色素瘤的具体机制尚不清楚。上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal transformation,EMT)是胚胎形态发生过程中高度保守的过程,与上皮细胞获得间充质特性相关。EMT除了对中胚层形成、神经嵴发育和心脏瓣膜形成等过程中起到重要作用外,还在上皮细胞癌侵袭、转移过程中起到重要作用。因此本研究通过观察ALA-PDT对黑色素瘤A375细胞株迁移、侵袭能力和上皮间质转化的影响,探讨ALA-PDT治疗黑色素瘤的可能机制,为黑色素瘤的临床治疗提供理论重要依据。本研究方法、结果和结论分别如下:方法1、利用CCK-8法检测ALA-PDT处理黑色素瘤A375细胞24h后,不同光照强度对细胞增殖的影响;2、利用划痕实验检测ALA-PDT处理黑色素瘤A375细胞24h后,不同光照强度对细胞迁移能力的影响;3、利用Transwell小室检测ALA-PDT处理黑色素瘤A375细胞24h后,不同光照强度对细胞侵袭能力的影响;4、Western Blot检测不同光照强度ALA-PDT处理黑色素瘤A375细胞24h后,上皮间质转化相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Snail、Slug蛋白的表达;5、Western Blot检测不同光照强度ALA-PDT处理黑色素瘤A375细胞24h后对TGF-β、Smad2、Smad3、PI3K/Akt、p38蛋白表达的影响。结果1、在经过不同光照强度(0J/cm~2、0.5J/cm~2、1.0J/cm~2、1.5J/cm~2、2.0J/cm~2、2.5J/cm~2)的ALA-PDT处理后24h。在光照强度小于1.5J/cm~2的情况下,ALA-PDT不会影响A375细胞的细胞活力。在光照强度分别为2.0J/cm~2和2.5J/cm~2时,细胞活力分别下降(9.31±1.16%)、(19.23±4.20%)(p<0.01)。2、采取划痕实验检测ALA-PDT对黑色素瘤A375细胞迁移能力的影响,经过不同光照强度(0J/cm~2、0.5J/cm~2、1.0J/cm~2、1.5J/cm~2)ALA-PDT处理后,细胞愈合率分别下降了7.2%,13.7%,32.8%。另外,采取Transwell小室侵袭实验检测ALA-PDT对黑色素瘤A375细胞侵袭能力的影响。细胞侵袭能力分别下降了62.1%、78.1%、86.3%,呈能量梯度依赖。3、不同光照强度的ALA-PDT处理黑色素瘤A375细胞24h后,经过Western Blot检测结果显示E-cadherin蛋白表达明显上升,Snail蛋白表达明显下降,差异有统计学意义,但Slug蛋白表达无明显差异。4、不同光照强度的ALA-PDT处理黑色素瘤A375细胞24h后,经过Western Blot检测结果显示TGF-β、Smad2、Smad3蛋白表达明显下降、p-p38、p-Akt蛋白表达明显上升,差异有统计学意义。结论1、ALA-PDT对黑色素瘤A375细胞增殖能力有抑制作用,呈光照强度依赖关系。2、低强度的ALA-PDT可以对黑色素瘤A375细胞迁移和侵袭能力有抑制作用,呈光照强度依赖关系。3、ALA-PDT能抑制黑色素瘤A375细胞上皮间质转化,其机制可能与抑制TGF-β/Smad信号通路有关。