固态发酵产虫草素及其分离纯化

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虫草素是蛹虫草中重要的活性成分之一,具有重要的药用价值和广泛的药理作用。但是其在天然虫草中含量很低且不易提取纯化,这些影响了虫草素的应用和进一步研究,因此提高虫草素的产量成为亟需解决的问题。实验室前期通过诱变育种得到一株性状稳定,具有高产潜力的菌株,本文以此作为出发菌株,对虫草素的固态发酵条件以及分离条件进行了研究。首先,对蛹虫草固态发酵产虫草素的培养基组成和培养条件进行了优化。通过一系列单因素实验和正交试验,确定大米为发酵基质,葡萄糖和酵母膏分别为最适碳源和氮源,得到最佳培养基组成和培养条件:大米30 g(粒径0.901.25 mm),料液比1:1.2,葡萄糖3%,酵母膏2%,麦麸1.5%,接种量20%,种龄2 d,发酵时间10 d,此条件下虫草素的产量为48.3 mg·g-1。其次,对虫草素的提取条件进行了优化,得到的最优提取方法为:乙醇浓度40%,料液比1:20,pH为4,在30℃下提取2次,每次提取2 h。提取以后除去固体残渣,经旋转蒸发、冷冻干燥后得到的虫草素纯度为5.56%。再次,利用大孔吸附树脂对虫草素进行了纯化,通过对20种大孔吸附树脂进行筛选,发现H103树脂对虫草素的分离效果较好,然后分析了影响其分离效果的因素。得到的最佳吸附与解吸条件为:pH为7,进样液浓度2.35 mg·mL-1,流速2 mL·min-1,进样量8个柱体积,洗脱剂40%乙醇,洗脱流速2 mL·min-1,洗脱5个柱体积。经过旋转蒸发、冷冻干燥,测定虫草素纯度为65.37%。最后,运用制备色谱对虫草素继续纯化。首先选择虫草素制备条件,得出最适甲醇:水为55:45。将制备色谱的分析条件线性放大,再对制备条件优化,得到最佳制备条件:甲醇:水为50:50,流速16 mL·min-1,进样量0.2 mL,进样浓度4 mg·m L-1,保留时间45 min。在此条件下,虫草素纯度为98.36%。
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