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研究背景:在各种高发的女性恶性肿瘤中,乳腺癌发病率越来越高,且在恶性肿瘤死亡中居首位,所以需要发现更多的特异性标志物和治疗的新靶点用于诊断和预后判断,从而研发新型分子靶向药物。Eph受体是最大的受体酪氨酸激酶(RTKs)亚家族,是组成细胞信号通路的重要部分。EphA2受体是Eph受体的成员之一,其特异性配体是EphrinA1。近年来,越来越多的研究者开始关注EphA2受体及其配体EphrinA1在乳腺癌中的作用,在诊断和治疗乳腺癌上EphA2受体及其配体EphrinA1将成为一个新靶点和新分子标志物。Caspsae-3是执行细胞凋亡的重要效应分子,大多细胞凋亡途径是通过Caspase-3引起细胞凋亡。治疗肿瘤的放疗和化疗依赖于细胞凋亡导致癌细胞的死亡,所以在肿瘤治疗中可作为抗肿瘤药物诱导凋亡的增强剂,在今后肿瘤的治疗中提供一个新思路。目的:本研究培养T淋巴细胞,通过已构建的Ad-EphrinAl-Caspase-3重组腺病毒感染T淋巴细胞,探究感染后其能否分泌靶向促凋亡蛋白EphrinAl-Caspase-3,及在其中EphrinAl和Caspase-3的表达情况。方法:1.培养T淋巴细胞。2.通过不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)的重组腺病毒Ad-EphrinAl-Caspase-3感染T淋巴细胞,免疫荧光检测表达EphrinAl的细胞量。3.采用MTT实验检测重组腺病毒Ad-EphrinAl-Caspase-3感染T淋巴细胞后细胞的增殖和毒性情况。4.通过定量PCR实验和ELISA实验检测感染后EphrinAl和Caspase-3的表达量。结果:1.培养的T淋巴细胞形态规则,大小均匀2.使用间接免疫荧光检测表达EphrinAl的细胞量,随着MOI的增高,表达EphrinAl的细胞(呈现绿色荧光)增多,MOI为100时表达EphrinAl的细胞数最多,此后随着MOI的升高(200)表达EphrinAl的细胞数减少,高MOI的病毒可能影响细胞的生存。3.使用MTT实验检测细胞的增殖和毒性,随着MOI的增加,细胞增殖活力下降。随着时间的延长,病毒对细胞生长的抑制作用越来越明显。4.定量PCR实验和ELISA实验检测感染后EphrinAl-Caspase-3的表达,EphrinAl和Caspase3表达增高。结论:Ad-EphrinAl-Caspase-3重组腺病毒感染T淋巴细胞后,EphrinAl和Caspase-3表达增高;随着MOI的升高,细胞的生存数量减少、细胞增殖活力下降,而且有时间和剂量依赖性。对于后续研究体内外靶向促凋亡基因EphrinAl-Caspase-3对乳腺癌细胞的杀伤作用奠定基础。