益发酊是我院自主研制用于治疗斑秃的中药复方外用制剂,批准文号为:粤药制字Z07022775,曾用名:生发灵酊。益发酊是采用乙醇浸渍提取等工艺制成的酊剂,该方由赤芍、当归、红花、侧柏叶等中药组成,主治血虚、血瘀所致的斑秃。临床观察表明,该制剂治疗280例斑秃患者,治疗组总有效率93.9%,明显优于对照组。在此基础上,我们观察了急性血瘀、脱毛、气虚模型大鼠外用益发酊后,对血液流变指标及毛发生长的影响,结果表明益发酊具有良好的活血化瘀及促毛发生长作用。为此,我们采用双长薄层扫描法对制剂中的阿魏酸进行了定量分析,制订了初步的质量标准。随着益发酊在临床上的应用,其治疗效果令患者及临床专家满意。但我们也认识到,该制剂自研制以来,存在制备工艺粗糙,质量控制标准落后等不足,严重阻碍了其临床疗效的发挥,因此迫切需要对其制备工艺及质量标准进行改进,更好地为临床服务。目的:本论文拟对益发酊的制备工艺及质量标准进行系统研究,筛选合理、经济的最佳制备工艺,建立简便准确、重现性好、专属性强的质量标准,使益发酊安全有效、质量可控,更好地为临床服务,同时也为开展益发酊新药的进一步研制提供实验依据。方法:1益发酊制备（提取）工艺研究1.1采用水蒸气蒸馏法,以挥发油提取量及时间为考察因素,分别对全部药材和部分含挥发油药材进行水蒸气蒸馏提取挥发油。1.2采用正交设计法以提取液中阿魏酸的含量为考察指标,以高效液相色谱法（HPLC）为分析检测方法,对影响提取过程的因素乙醇浓度（A）、乙醇用量（倍数）（B）、提取时间（C）进行考察,每个因素选择3个水平。2建立益发酊剂的定性、定量质量标准方法2.1定性研究方法:以对照品、对照药材为参照,采用薄层色谱法对益发酊剂处方中的主要药材进行鉴别。2.2定量研究方法:建立高效液相色谱法测定益发酊中阿魏酸、芍药苷含量的方法,并进行方法学的考察,包括测定条件、方法的线性关系、精密度、重复性、稳定性及加样回收率试验等。结果:1.制备（提取）工艺研究:1.1挥发油的提取工艺研究结果表明:全部药材共煎的方法提取挥发油,与含挥发油的药材先共煎提取挥发油,两种方法所得的挥发油量没有显著性差异,提取4.5小时后,油量均不再增加。因此确定4.5小时为挥发油的提取时间。当归等三种含挥发油的药材先煎提取挥发油提取曲线与总挥发油提取曲线高度拟合,表明该三种药材挥发油基本上等于总挥发油。将含挥发油的药材进行水蒸气蒸馏提取,药渣再与其他药材合并浸提其他有效成分,最后按制备工艺配制益发酊,不仅能保证挥发油的完全提出,同时还能节约能耗,是较为合理、经济的提取工艺。1.2浸提工艺研究结果表明,以阿魏酸的含量为检测指标,益发酊的最佳提取工艺为A₂C₃B₂,即乙醇浓度为75%,浸渍时间为120h,乙醇用量为8倍药材量时对益发酊中阿魏酸的提取最完全。方差分析结果显示,A、C因素P＜0.01有显著性差异,说明该两因素对制备提取工艺更为重要,B因素溶剂用量对含量影响相对较小。2.质量标准研究2.1定性研究结果表明:对益发酊中的6味药材进行薄层色谱定性鉴别,在益发酊供试品的相应位置可检出赤芍、当归、侧柏叶、制何首乌、红花及地黄的特征色谱,斑点清晰,分离度好,阴性无干扰,方法专属性强。2.2定量研究结果表明:方法学研究表明,建立的用高效液相色谱法测定阿魏酸、芍药苷含量的方法,线性关系、精密度、重复性、稳定性及加样回收率均符合要求。样品测定中,通过流动相的优化,使样品中阿魏酸、芍药苷峰形好,与杂质峰分离度高,并且有效地除去峰后杂质,使得色谱峰重现性好。益发酊中芍药苷的含量平均为0.0348mg/ml、阿魏酸的含量平均为0.0375mg/ml。结论:益发酊的最佳制备工艺为:含挥发油的三种药材先经水蒸汽蒸馏提取4.5小时,药渣再与其他药材合并,用8倍量75%的乙醇浸渍120h,浸渍液过滤后,滤液加入已提取的挥发油,调整乙醇至规定浓度,加纯化水至刻度,搅匀后即可。该工艺可使制剂中阿魏酸的含量最高,筛选的工艺合理、经济,有效成分阿魏酸含量高,有可能提高制剂的临床疗效。采用薄层色谱法制定的益发酊中主要药材的定性鉴别方法,该方法阴性无干扰,重现性好,方法具有专属性。采用高效液相色谱法建立的益发酊君药当归、赤芍有效成分阿魏酸、芍药苷的含量测定方法,简便准确,重现性好,可作为益发酊制剂的质量控制标准。