影响羽毛发育的生长因子及相关ev21LTR调控的研究

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为了揭示快慢羽速度差异形成的秘密,寻找控制羽毛发育的基因,本研究选择Bmp2,Shh基因分析在出壳一天快慢羽鸡中翼羽皮肤和翼羽毛囊中的表达情况,来研究这两个基因与羽速性状的相关性以及是否存在表达差异。本文在快慢羽羽毛发育的研究得到如下的结论: 1) 通过对快慢羽的翼羽皮肤部分横切面上进行伊红染色,无论是间质细胞的浓度还是上皮细胞的厚度都没有很大的差别。 2) 利用原位杂交技术发现,无论是快羽鸡和慢羽鸡中,在出壳第一天时Shh的表达仅限于表皮羽环和表皮滤泡;而在快羽鸡和慢羽鸡中,Bmp2的表达仅限于表皮羽环。这与前人的研究是一致的。但是试验结果意味着在出生第一天的快慢羽鸡中,Shh和Bmp2没有显著的表达位置的差异。 3) 通过实时定量PCR技术发现Shh,Bmp2基因在主翼羽和覆主翼羽的毛囊中都有表达,但是经过统计分析发现在快慢羽中羽毛毛囊的表达量上并没有显著性差异(p>0.05)。通过白莱航的慢羽鸡研究ev21的LTR的功能活性。 研究结果发现: 1)启动子的活性检测:禽类ev21的LTR的报告基因分析表明LTR在CEF(鸡的成纤维细胞)中保持可检测的启动子活性,并且相对于报告基因的两种方向都可以启动转录,而在CHO细胞中活性降低了2~10倍,且当LTR反向检测不到启动子活性。 2)增强子的活性检测:当LTR相对于报告基因反向时可以在CHO中检测到较强的增强子功能活性,其他构建体的活性都很低。 3)转录因子结合位点预测相对于ev1,ev21的LTR多出了两个禽类特异转录因子结合位点,即GATA-X和OCT-1,研究表明这两个转录因子都对胚胎早期的表达起着调控作用。也许正是这两个转录因子结合到ev21的LTR上,影响着LTR的活性,以致于影响ev21的上下游潜在基因的表达调控。
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