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目的利用荧光素酶报告基因实验对miR221/222的靶基因(PUMA)进行验证；通过MTT及caspase检测,研究miR221/222对肺癌细胞XWLC-05增殖及凋亡的影响；应用实时荧光定量PCR技术检测PUMA mRNA在肺癌细胞中的表达差异,探讨miR221/222在云南宣威肺癌细胞株XWLC-05中对其靶基因PUMA的调控作用。方法1.通过基因克隆的方法构建荧光素酶报告基因载体；2.培养云南宣威肺癌细胞株XWLC-05,通过细胞转染进行后续实验；3.进行荧光素酶报告基因实验,检测荧光素酶活性,验证PUMA是否为miR221/22的靶基因：4.应用MTT实验研究miR221/222对细胞增殖的影响；5.通过caspase3/7、9的活性检测,分析细胞凋亡状态；6.应用实时荧光定量PCR技术检测PUMA mRNA的表达差异。结果1.所构建的荧光素酶基因载体经测序结果显示正确；2.荧光素酶报告基因分析显示：rniR221/222能够直接作用于PUMA基因的3’UTR端。3.MTT检测细胞增殖状态：Over-expression转染的组别能促进细胞增殖；In-expression转染的组别能有效抑制细胞增殖。4.caspase3/7、9活性的变化为：Over-expression转染的组别caspase3/7、9活性均降低；In-expression转染的组别caspase3/7、9活性均升高。5.实时荧光定量PCR检测PUMA mRNA的表达变化,结果显示：XWLC-05细胞经转染后各个处理组之间PUMA mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.成功构建了荧光素酶报告基因载体；2.在云南宣威肺癌细胞株XWLC-05中,PUMA是miR221/222的靶基因；3.miR221/222能够通过PUMA影响细胞增殖及凋亡；4.miR221/222在与其靶基因PUMA的作用过程中,从mRNA的水平来看,对于降解mRNA无明显作用。