目的通过构建pGenesil-1-shRNA-Alox5重组质粒,研究干扰花生四烯酸5-脂氧合酶(Arachidonate5-lipoxygenase,Alox5)基因在耐阿霉素(Adriamycin,ADM)的慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)K562/ADM细胞株中的促凋亡作用和逆转多药耐药效果,为CML的临床多药耐药治疗奠定基础。方法1、设计3对特异性Alox5基因的shRNA寡核苷酸序列,构建pGenesil-1-shRNA-Alox5重组质粒,转染K562/ADM细胞,通过real-time PCR和Western blot检测Alox5基因及其蛋白的表达水平,筛选出Alox5基因最佳干扰组。2、选择Alox5基因最佳干扰组为实验组、Sh-NC空载体组为阴性对照组、K562/ADM细胞组为空白对照组,采用RT-PCR及real-time PCR、Western blot、流式细胞术(Flow cytometry,FCM)分别检测3组细胞中bcr/abl融合基因,BCR/ABL融合蛋白、促凋亡蛋白Bax及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平和K562/ADM细胞凋亡率。3、采用Western blot分别检测3组K562/ADM细胞的耐药相关蛋白MDR1、P-gp、BCRP的表达水平和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达水平。结果1、经酶切及测序证实shAlox5-153、shAlox5-461和shAlox5-14783组重组质粒构建成功。2、与Sh-NC空载体组和K562/ADM空白对照组相比,转染了各重组质粒的K562/ADM细胞Alox5基因及其蛋白表达水平均明显下降,其中shAlox5-461转染组下调最明显。3、选择干扰效率最高的shAlox5-461组为转染实验组,与Sh-NC空载转染组和K562/ADM空白细胞组相比,shAlox5-461转染后其K562/ADM细胞的bcr/abl融合基因和BCR/ABL融合蛋白的表达水平均明显下降,细胞凋亡率增加,促凋亡蛋白Bax的表达水平上升,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平下调,差异均具有统计学意义(p<0.05)。4、与Sh-NC空载组和K562/ADM空白细胞组相比,shAlox5-461转染组K562/ADM细胞的耐药相关蛋白MDR1、P-gp和BCRP的表达水平均明显下降,PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达水平下调,差异均具有统计学意义(p<0.05)。结论1、shAlox5-461重组质粒组可显著降低K562/ADM细胞中bcr/abl融合基因和BCR/ABL融合蛋白的表达水平;通过增加促凋亡蛋白Bax和抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平增加细胞凋亡率,说明干扰Alox5基因可从细胞水平上抑制其致癌蛋白BCR/ABL的表达,并促进细胞凋亡。2、干扰Alox5基因可能通过调节PI3K/AKT信号通路抑制K562/ADM细胞的耐药相关蛋白MDR1、P-gp和BCRP的表达水平,逆转其耐药。