论文部分内容阅读
禽传染性支气管炎病毒（Avian Infectious Bronchitis Vires，IBV）N基因编码该病毒核衣壳蛋白（Nucleocapsid Protein），是IBV相对稳定和保守的基因，对N基因进行研究，在IBV的检测、血清学分型、免疫特别是研制高效的DNA疫苗中具有重要意义。本研究对2株禽传染性支气管炎病毒标准毒株M41、H120和3株四川地区分离株SAIBWJ、SAIB20、SAIB14的N基因进行RT-PCR、克隆和序列测定分析，并对其编码蛋白进行了分析，主要结果如下： 1．根据国际基因库Genbank公布的禽传染性支气管炎病毒N基因序列经多重比较设计的一对引物，对5株IBV(M41、H120、SAIBWJ、SAIB20、SAIB14)进行了RT-PCR扩增，5株均获得了长约1.2kb的特异扩增条带。将5株IBV毒株RT-PCR特异扩增产物定向插入到pUC18质粒多克隆位点，构建了含N基因的克隆质粒，转化DH5u载体菌，筛选获得阳性克隆菌株。 2．对3个克隆质粒中的目的基因片段进行序列测定，结果表明该片段含有IBV N基因全序列，其结构基因全长1227bp，编码409个氨基酸。在国内首次将四川分离的3株IBV的N基因序列在国际基因库Genbank中注册，注册号SAIBWJ为AY121091，SAIB20为AY121092，SAIB14为AY121093。 3．将3株四川分离株N基因序列用Bioedit软件与国内外已经在国际基因库Genbank中注册的IBV标准株M41N基因进行同源性分析，结果表明SAIBWJ、SAIB20、SAIB14N基因核苷酸序列与M41N基因同源率分别为97.7％、93.1％、98.0％，相应的氨基酸序列同源率分别为96.5％、94.1％、97.5％。用ANTHEPRO软件对19株IBV毒株核蛋白保守区域分析结果表明，19株毒株存在15个氨基酸以上的完全保守区域3个，分别在87～102位、143～159位、254～268位。将四川分离株N基因序列用Phylip软件与国内外已经在国际基因库Genbank中注册的16株IBVN基因全序列进行系统进化树分析，结果表明，SAIBWJ、SAIB14与H52、M41的亲缘关系最近：SAIB20与Gray、Ark99、De072的亲缘关系最近，结果与血清学分型一致。 本研究克隆并测定出了3株IBV四川分离株的N基因，丰富了IBV分子流行病学资料，为进一步研究IBV的分子水平检测方法，研制IB DNA疫苗提供了基础材料。