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心房颤动（房颤）是一种较为常见的心律失常,患者有心力衰竭、缺血性脑卒中等并发症,甚至死亡。房颤的病因复杂,确切机制尚不清楚,学界普遍认为主要包括心房肌电重构、结构重构。结构重构包括细胞凋亡、心肌成纤维细胞增生、细胞外基质过度沉积形成纤维化等改变。心房纤维化是房颤发生、维持的重要因素。MicroRNA（miRNA）是一种长度约为22个核苷酸的非编码RNA,可降解mRNA或抑制mRNA编码的蛋白质翻译,调节靶基因表达。基质金属蛋白酶（MMP）在降解细胞外基质（ECM）中蛋白质成分发挥重要作用,其中包括主要的纤维化成分Ⅰ型胶原蛋白（collagenⅠ）等。若MMP的降解能力低于ECM的生成,则ECM降解减少,导致ECM的过度沉积,引起组织纤维化。因此,我们假设miR-199a-3p可能通过调节MMP16的表达调控心房纤维化,影响房颤的发生和维持。本研究旨在探讨miR-199a-3p在大鼠房颤中的作用及其机制。实验分三个部分,第一部分建立大鼠房颤模型,探讨miR-199a-3p与胶原容积分数（CVF）是否相关。第二部分利用生物信息学数据库Target Scan寻找miR-199a-3p的潜在靶基因。第三部分构建腺相关病毒转染大鼠,通过干预大鼠心房的miR-199a-3p的表达量,验证MMP16是否为miR-199a-3p的靶基因。第一部分MiR-199a-3p在大鼠心房颤动模型中的作用研究目的和意义:初步探讨miR-199a-3p在大鼠房颤发生及发展中的作用方法:经尾静脉注射CaCl2-Ach复合物建造SD大鼠房颤模型,分为窦律（SR）组与房颤（AF）两组。使用实时荧光定量聚合酶链式反应技术（RT-qPCR）分别检测两组大鼠心房的miR-199a-3p表达量,RT-qPCR检测两组大鼠心房collagenⅠ的mRNA表达量,masson染色检测两组大鼠心房CVF,免疫印记（WB）检测两组大鼠collagenⅠ蛋白表达量。结果:AF组的miR-199a-3p（2.11±0.44）、CVF（14.09±0.65）均高于SR组的miR-199a-3p（1.00±0.19）（p<0.05）、CVF（11.63±0.66）（p<0.05）,AF组的collagenⅠ蛋白表达（0.91±0.04）高于SR组（0.73±0.04）（p0.05）。两组的心房标本的miR-199a-3p表达水平均与CVF呈正相关（r=0.78 p<0.05）。结论:miR-199a-3p在房颤的发生及维持中发挥作用,机制可能是通过促进心房纤维化引发房颤。第二部分通过生物信息学软件预测MMP16为miR-199a-3p的潜在靶基因目的和意义:预测miR-199a-3p的靶基因及结合位点方法:利用Target Scan生物信息学网站检测miR-199a-3p的靶基因及结合位点。结果:Target Scan网站预测结果显示,MMP16-3’UTR区有1个与miR-199a-3p结合的位点。结论:MMP16可能为miR-199a-3p的靶基因第三部分miR-199a-3p靶向调控MMP16/collagenⅠ通路在大鼠心房纤维化中的作用研究目的和意义:通过构建和应用miR-199a-3p低表达及过表达腺相关病毒转染SD大鼠,探讨miR-199a-3p大鼠房颤模型中对MMP16、collagenⅠ的影响。方法:第一节构建miR-199a-3p低表达及过表达基因,并且以腺相关病毒作为载体,整合进入病毒基因序列。将已经构建好的病毒载体转染至AAV-293细胞（病毒包装）,纯化病毒并检测病毒的滴度。第二节,将30只雄性SD大鼠按照不同处理方式随机分为3组:（1）阴性对照（NC）组（n=10）:经尾静脉注射阴性对照腺相关病毒（HBAAV2/9-TNT-GFP NC对照,剂量为200 u L/只）,之后常规饲养,2周后予以CaCl2-Ach复合液尾静脉注射;（2）miRNA-199a-3p低表达组（n=10）:经尾静脉注射miR-199a-3p低表达腺相关病毒（HBAAV2/9-MiR30-rno-miR-199a-3p-GFP,剂量为200 u L/只）,之后常规饲养,2周后予以CaCl2-Ach复合液尾静脉注射;（3）miRNA-199a-3p过表达组（n=10）:经尾静脉注射miR-199a-3p过表达腺相关病毒（HBAAV2/9-TNT-rno-miR-199a-GFP,剂量为200 u L/只）,之后常规饲养,2周后予以CaCl2-Ach复合液尾静脉注射。RT-qPCR检测三组大鼠miR-199a-3p的表达量,MMP16及collagenⅠ的mRNA的表达量,使用masson染色检测三组大鼠心房CVF,WB检测三组大鼠MMP16及collagenⅠ蛋白表达量,用心电图机描记大鼠房颤的诱发率及持续时间。结果:RT-qPCR检测miR-199a-3p显示,与NC组（1±0.45）相比,低表达组的表达量（0.22±0.13）降低（p<0.05）;过表达组的表达量（2.58±1.52）升高（p0.05）。MMP16蛋白相对表达量的比较:与NC组（0.48±0.11）比较,低表达组MMP16表达量（0.63±0.12）增加（p<0.05）,显示miR-199a-3p低表达可增加大鼠心肌组织中MMP16蛋白的表达;与NC组比较,过表达组MMP16表达量（0.32±0.11）减少（p<0.05）,显示miR-199a-3p过表达可减少大鼠心肌组织中MMP16蛋白的表达。collagenⅠ蛋白表达量的比较:与NC组（0.62±0.15）比较,低表达组的collagenⅠ表达量（0.46±0.14）减低（p<0.05）,显示miR-199a-3p低表达可降低大鼠心肌组织中collagenⅠ蛋白的表达;与NC组比较,过表达组的collagenⅠ蛋白表达量（0.81±0.12）增加（p<0.05）,显示miR-199a-3p低表达可增加大鼠心肌组织中collagenⅠ蛋白的表达。Masson结果显示各组心肌CVF比较:与NC组（14.90±1.29）比较,低表达组CVF（12.84±1.32）减低（p<0.05）,显示miR-199a-3p低表达可降低心肌纤维化程度;与NC组比较,过表达组CVF（16.77±1.35）增加（p<0.05）,显示miR-199a-3p过表达可增加心肌纤维化程度。ECG结果:三组大鼠房颤诱发率相比:与NC组（7/10）比较,低表达组诱发率（4/10）下降,尚无统计学差异;与NC组比较,过表达组房颤诱发率（9/10）增高,尚无统计学差异。三组大鼠房颤持续时间相比:与NC组（14.0±3.9）比较,低表达组房颤持续时间（6.8±2.5）缩短（P p<0.05）,显示miR-199a-3p低表达可减低房颤的持续时间;与NC组比较,过表达组房颤持续时间（26.7±5.1）增加（p<0.05）,显示miR-199a-3p过表达可增加房颤的持续时间。结论:通过构建miR-199a-3p低表达及过表达腺相关病毒转染SD大鼠的方法,能有效达到低表达及过表达大鼠心肌miR-199a-3p表大量的目的。miR-199a-3p可能通过靶向调控MMP16/collagenⅠ信号通路,在大鼠房颤发生、发展中发挥一定的作用。