生脉散抑制高糖环境下心肌细胞凋亡的分子机制研究

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第一部分生脉散对高糖环境下的H9c2心肌细胞抗凋亡作用的研究目的:研究生脉散水提物及单体对高糖环境下H9c2心肌细胞的抗凋亡作用。方法:从服用生脉散水提物及单体的大鼠采集含药血清,对正常环境下及高糖环境下H9c2心肌细胞进行干预,用MTT法筛选生脉散水提物和单体配方的最佳浓度,并通过细胞存活率以判定其对高糖环境下的心肌细胞的保护作用。结果:生脉散水提物及单体对正常H9c2心肌细胞活力的影响显示两组浓度达到100μL时,成活率最高,与其他各组具有差异(P<0.05)。在高糖环境下,两种药物对心肌细胞作用的成活率与其药液浓度也呈现正相关,浓度在100μL时,成活率最高,与其他各组具有显著性差异(P<0.01)。结论:研究显示生脉散水提物及单体对高糖环境下的H9c2心肌细胞损伤具有保护作用。第二部分生脉散有效组分抗心肌细胞凋亡作用的机制研究目的:研究生脉散有效组分对高糖环境下的心肌细胞抗凋亡作用的机制。方法:培养乳鼠心肌细胞,分为对照组、模型组,水提物高中低组(100μL、50μL、10μL含药血清)、单体高中低组(100μL、50μL、10μL含药血清)。除对照组(葡萄糖浓度:5.5mmol/L),其他各组保持高糖环境(葡萄糖浓度:25mmol/L)。用流式细胞仪检测心肌细胞的凋亡率;Western-blot检测药物对p53、Bcl-2和Bax蛋白表达;Q-PCR检测Fas和Fas-L mRNA的转录量。结果:模型组与对照组比较细胞的凋亡率明显升高(P<0.01);单体高中低组及水提物高中组随着剂量的增加其细胞凋亡率显著下降,各组与模型组比较细胞凋亡率均显著下降(P<0.01)。与模型组比较,生脉散单体组与水提物组均能减少心肌细胞内Bcl-2含量,增加Bax和p53的含量(P<0.05),随着剂量的增加,作用明显。且生脉散单体与水提物高剂量组在减少心肌细胞内Bcl-2含量,增加Bax和p53的含量方面作用相当(P>0.05)。与对照组比较,模型组减少心肌细胞外FASL转录含量,增加FAS的转录含量(P<0.05);其他各组与模型组无显著性差异(P>0.05)。结论:生脉散单体组分能有效抑制高糖环境下的心肌细胞的凋亡,其作用与生脉散水提物的效果相当,且其抗凋亡的机制可能与阻断线粒体凋亡通路有关。
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