【摘 要】
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NAC转录因子是植物特有的,并参与植物对胁迫的反应。转录因子可以调控基因的表达。植物在新陈代谢中会产生活性氧,正常环境下,植物中活性氧的产生与消除是动态平衡的;逆境胁迫下,会导致活性氧迅速积累,所以植物中形成了抗氧化剂防御机制来避免活性氧的伤害。实验室前期克隆了辽宁碱蓬SlNAC2基因。发现非生物胁迫条件下,转SlNAC2拟南芥抗氧化酶活性提高,SlNAC2可能对抗氧化酶基因的表达具有调控作用。本
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NAC转录因子是植物特有的,并参与植物对胁迫的反应。转录因子可以调控基因的表达。植物在新陈代谢中会产生活性氧,正常环境下,植物中活性氧的产生与消除是动态平衡的;逆境胁迫下,会导致活性氧迅速积累,所以植物中形成了抗氧化剂防御机制来避免活性氧的伤害。实验室前期克隆了辽宁碱蓬SlNAC2基因。发现非生物胁迫条件下,转SlNAC2拟南芥抗氧化酶活性提高,SlNAC2可能对抗氧化酶基因的表达具有调控作用。本研究选择三个编码关键抗氧化酶的基因CSD1、CAT2、TAPX进行研究,实时荧光定量PCR分析转SlNAC2基因拟南芥中CSD1、CAT2、TAPX基因的表达,同时测定活性氧含量。酵母单杂交分析SlNAC2转录因子与CSD1、CAT2、TAPX启动子的相互作用。主要结果如下:
1、盐、干旱、ABA处理条件下,转SlNAC2株系较野生型株系CSD1、CAT2、TAPX基因表达显著上调,转SlNAC2基因拟南芥中积累的活性氧显著低于野生型拟南芥。表明SlNAC2转录因子上调了CSD1、CAT2、TAPX基因的表达,从而降低了活性氧含量。
2、搜索NCBI数据库,获得CSD1、CAT2、TAPX启动子序列,利用BDGP:NeuralNetworkPromoterPrediction在线软件对启动子的核心区域进行预测,发现均含有NAC转录因子结合位点(CGTG/A)。酵母单杂交结果表明SlNAC2转录因子能与CSD1、CAT2、TAPX启动子结合,推测SlNAC2转录因子直接调控CSD1、CAT2、TAPX基因的表达。
3、SlNAC2原核表达结果显示,SlNAC2目的蛋白可在大肠杆菌中高效表达,且低温有利于SlNAC2蛋白的可溶表达。由于时间关系尚未纯化出SlNAC2可溶蛋白,后续将进一步纯化蛋白,体外研究SlNAC2转录因子与CSD1、CAT2、TAPX启动子的相互作用。
综上所述,SlNAC2转录因子直接调控CSD1、CAT2、TAPX基因的表达,从而清除活性氧提高植物抗逆性。本研究为SlNAC2转录因子提高植物抗逆性提供理论依据。
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