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磷脂酰甘油(Phosphatidylglycerol,简称PG)作为肺表面活性物质的重要组分,能够降低肺表面张力,能够较好地维持肺泡结构和功能的稳定,在新生儿呼吸窘迫综合症等肺部疾病诊疗中具有应用潜力。PG作为天然表面活性剂在组织防冻、皮肤养护等领域也有应用前景。天然来源的PG同其他磷脂组分相同,结构上呈现不同脂肪侧链特点,动植物组织含量低,来源有限。本文利用磷脂酶D(Phospholipase D,简称PLD)催化磷脂酰基转移反应,由易于获得的大豆磷脂酰胆碱(Phosphatidylcholine,简称PC)制备混合侧链磷脂酸甘油(Different Fatty Acids Phosphatidylglycerol,简称 DFA-PG),研究提高产品产率的反应条件,以硅胶柱层析分离纯化DFA-PG工艺过程;表征所制备DFA-PG的脂肪酸组成、表面活性剂特性及其聚集行为,为工业化生产及应用提供参考。通过单因素实验优化双液相体系中PLD催化磷脂酰基转移反应制备DFA-PG条件,得出了适宜的反应条件。有机溶媒为二氯甲烷,反应温度为28℃,底物甘油(G1)与PC摩尔比(G1:PC)为190:1,pH为5.5,两相体积比(有机相:水相)为2.5:1。在此条件下进行反应,DFA-PG的产率达85.59%。在此基础上,采用均匀试验进行U12(12l×63)混合水平试验设计考察因素间的交互作用,通过多元非线性回归及响应面分析进一步优选的反应条件为:温度30.5℃、底物摩尔比(G1:PC)190:1、pH5.5、两相体积比(有机相:水相)1.7:1。在此条件下DFA-PG产率可达97.54%。以100～200目柱层析硅胶为固定相,采用柱层析法对酶催化合成的DFA-PG进行精制。优化常温常压柱层析分离条件,结果显示在洗脱液组成氯仿:甲醇为2:1(v/v)、上样量为0.03 g/g硅胶、流速为3 mL/min、硅胶含水量为9%(wt)条件下得到的DFA-PG纯度达97.6%,分离回收率为90.5%。同时,获得纯度达98.2%的高纯PC产品。通过气相-质谱联用(GC-MS)分析DFA-PG和原料PC脂肪酸种类,结果表明,产物与原料均含有5种脂肪酸,且种类及含量一致。表面活性剂特性表征显示,Wilhelmy吊片法测定的DFA-PG临界胶束浓度(CMC)为0.4904mg/mL,而纯化的原料PC为1.4673 mg/mL,水溶液表面张力分别为35.3 mN/m和40.1 mN/m,表明DFA-PG降低水表面张力的能力及效率均优于PC;透射电镜测试表明,DFA-PG聚集状态随着pH而变化,pH为7.4时,呈囊泡状,平均粒径为131.19 nm,结构比较稳定;pH为6.9时,呈棒状胶束,平均粒径为88.23 nm;pH为6.4时,呈球形胶束,平均粒径为25.98 nm。