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生命科学的发展对分析化学提出了新的要求,如何在复杂体系中选择性检测超痕量生物活性物质,一直是分析工作者面临的难题。近年来,随着纳米技术的迅速发展,纳米材料逐渐被运用到细胞生物学和分子生物学领域,纳米磁性功能材料以其独特的优势在生化分析领域显示了广阔的应用前景。 本文将自制的纳米磁性高分子微球与电化学检测技术结合起来,利用经过化学修饰的纳米磁性微球结合生化物质,制备了具有高灵敏度和选择性的DNA电化学生物传感器,为痕量特定序列DNA的检测提供了一类新方法,在生命科学研究和医学应用方面具有实际意义。 本文第一章主要对有关磁性高分子微球的研究意义、结构与特点、现状进行了介绍,系统阐述了磁性高分子微球的制备方法、固定生物活性物质的方法以及在生化医药领域的应用,提出了本论文总的研究思路。 在借鉴和总结前人工作的基础上,本文第二章优化了磁性高分子微球合成条件,采用分散聚合法,成功制得了纳米级的磁性羧基微球和磁性氨基微球,并对磁性微球进行了表征和结合生化物质的荧光定性试验。实验结果表明,所制得的微球具有超顺磁性,粒径较均匀,能有效结合生化物质。 论文第三章研究了将自制的纳米磁性羧基微球用于测定特定序列DNA。采用化学偶联法将末端修饰氨基的单链DNA固定在纳米羧基磁性球表面,制成新型DNA探针,利用分子杂交技术,在磁场作用下用示差脉冲伏安法检测靶向DNA。本方法将磁性微球可定向修饰,易于分离、富集的特点和高灵敏度的电化学方法结合起来,操作方便,仪器简单,具有很高的选择性和灵敏度。实验中对靶向DNA的检测下限达到8.6×10-10mol/L。 论文第四章设计了一种高灵敏的DNA电化学生物传感器用于DNA杂交检测。以醛基二茂铁为电活性标记物,制得末端标记的DNA电化学探针;利用氨基磁性微球比表面积大和结合生化物质的特性,实现了对痕量目标DNA的富集,构建了纳米磁性DNA富集器,将探针和结合了目标DNA的纳米磁珠进行杂交反应,用电化学方法检测其杂交结果。同样,该方法也具有操作简单,灵敏度高的特点。